معلومة

4.1: مقدمة في التلوين - علم الأحياء

4.1: مقدمة في التلوين - علم الأحياء


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أهداف التعلم

  • وصف الاختلافات بين تقنيات التلوين البسيطة والتلطيخ التفاضلي.
  • ناقش كيفية تحضير مسحة بكتيرية من كائنات مستزرعة.
  • يميز بين البكتيريا موجبة الجرام والبكتيريا سالبة الجرام.
  • وصف عملية إجراء صبغة غرام.
  • استخدم الفحص المجهري لفحص الخلايا المصبوغة بالجرام.
  • وصف إجراءات تلطيخ خاصة وعرض أمثلة عليها تحت الغمر بالزيت.

لماذا علينا تلطيخ البكتيريا؟

لا تحتوي معظم أنواع الخلايا على الكثير من الصبغة الطبيعية وبالتالي يصعب رؤيتها تحت المجهر الضوئي ما لم تكن ملطخة. تُستخدم عدة أنواع من البقع لجعل الخلايا البكتيرية أكثر وضوحًا. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام تقنيات تلطيخ محددة لتحديد الخصائص الكيميائية الحيوية أو الهيكلية للخلايا ، مثل نوع جدار الخلية ووجود أو عدم وجود الأبواغ الداخلية. يمكن أن يساعد هذا النوع من المعلومات العلماء في تحديد وتصنيف الكائنات الحية الدقيقة ، ويمكن أن يستخدمها مقدمو الرعاية الصحية لتشخيص سبب العدوى البكتيرية.

البقعة البسيطة

أحد أنواع إجراءات التلوين التي يمكن استخدامها هو وصمة عار بسيطة، حيث يتم استخدام بقعة واحدة فقط ، وتظهر جميع أنواع البكتيريا كلون لتلك البقعة عند عرضها تحت المجهر. بعض البقع التي يشيع استخدامها للتلوين البسيط تشمل البنفسجي الكريستالي والسافرانين والأزرق الميثيلين. يمكن استخدام البقع البسيطة لتحديد شكل وترتيب الأنواع البكتيرية ، لكنها لا تقدم أي معلومات إضافية. البكتيريا الحية تكاد تكون عديمة اللون ، ولا تقدم تباينًا كافيًا مع الماء الذي علقت فيه حتى يمكن رؤيتها بوضوح. الغرض من التلوين هو زيادة التباين بين الكائنات الحية والخلفية بحيث يمكن رؤيتها بسهولة أكبر في المجهر الضوئي. في بقعة بسيطة ، يتم تلطيخ مسحة بكتيرية بمحلول صبغة واحدة تلطخ جميع الخلايا بنفس اللون دون تمايز بين أنواع الخلايا أو الهياكل. الصبغة المفردة المستخدمة هنا في مختبرنا هي الميثيلين الأزرق ، وصمة عار أساسية. البقع الأساسية ، ذات الشحنة الموجبة ، ترتبط بقوة بمكونات الخلايا سالبة الشحنة مثل الأحماض النووية البكتيرية وجدران الخلايا.

الصورة 1: منظر مجهري للبكتيريا على شكل عصيات (قضيب) ملطخة بالبنفسجي الكريستالي. تم عزلها وتصويرها من قبل منتصر علم ، جامعة دكا ، قسم الأحياء الدقيقة عام 2007. https://commons.wikimedia.org/wiki/F...micrograph.jpg

شاهد الفيديو 1: كيفية وضع صبغة بسيطة

شاهد الفيديو 1: كيفية تطبيق بقعة بسيطة على ثقافة بكتيرية بواسطة NC BioNetwork (4:05) URL: https://youtu.be/8ODeT9DLHKI

صبغة غرام

غالبًا ما يختار العلماء أداء ملف وصمة عار تفاضلية، لأن هذا يسمح لهم بجمع معلومات إضافية حول البكتيريا التي يعملون معها. تستخدم البقع التفاضلية أكثر من صبغة واحدة ، وسيكون للخلايا مظهر مختلف بناءً على خصائصها الكيميائية أو التركيبية. بعض الأمثلة على البقع التفاضلية هي صبغة جرام ، وصمة عار الحمضية ، وصمة البقع الداخلية. سوف تتعلم كيفية تحضير الخلايا البكتيرية للتلوين ، والتعرف على تقنية صبغ الجرام.

تم تطوير هذا الإجراء الشائع الاستخدام لأول مرة من قبل عالم البكتيريا الدنماركي هانز كريستيان غرام في عام 1882 (نُشر عام 1884) أثناء العمل مع عينات الأنسجة من رئتي المرضى الذين ماتوا بسبب الالتهاب الرئوي. منذ ذلك الحين ، تم استخدام إجراء صبغة غرام على نطاق واسع من قبل علماء الأحياء الدقيقة في كل مكان للحصول على معلومات مهمة حول الأنواع البكتيرية التي يعملون معها. يمكن أن تساعد معرفة تفاعل الجرام للعزلة السريرية أخصائي الرعاية الصحية في إجراء التشخيص واختيار المضاد الحيوي المناسب للعلاج.

تعكس نتائج صبغة غرام الاختلافات في تكوين جدار الخلية. غرام إيجابي تحتوي الخلايا على طبقات سميكة من الببتيدوغليكان (كربوهيدرات) في جدرانها الخلوية ؛ غرام سالب البكتيريا لديها القليل جدا. تحتوي البكتيريا موجبة الجرام أيضًا على أحماض تيكويك ، في حين أن سلبية الجرام لا تحتوي عليها. تحتوي الخلايا السالبة الجرام على غشاء خارجي يشبه طبقة ثنائية الفسفوليبيد لغشاء الخلية. يحتوي الغشاء الخارجي على عديدات السكاريد الدهنية (LPS) ، والتي يتم إطلاقها على شكل السموم الداخلية عندما تموت الخلايا السالبة الجرام. قد يكون هذا مصدر قلق لشخص مصاب بعدوى ناتجة عن كائن حي سلبي الجرام.

الصورة 2: صورة مجهرية لصبغة جرام مختلطة موجبة الجرام (المكورات العنقودية الذهبية ATCC 25923 ، أرجواني) وعصيات سالبة الجرام (الإشريكية القولونية ATCC 11775 ، أحمر). التكبير: 1،000. صورة Y Tambe. https://commons.wikimedia.org/wiki/F...m_stain_01.jpg

شكل 1 يوضح أدناه الاختلافات الرئيسية بين جدران الخلايا الموجبة لصبغة جرام وسالبة الجرام. تنعكس الاختلافات في تكوين جدار الخلية في الطريقة التي تتفاعل بها الخلايا مع البقع المستخدمة في إجراء صبغة جرام.

من الأفضل إجراء صبغات الجرام على المزارع الجديدة - فقد يكون للخلايا القديمة جدران خلوية تالفة ولا تعطي تفاعل الجرام المناسب. تُعرف أنواع معينة باسم متغير غرام، وبالتالي قد تظهر ردود الفعل الإيجابية والسلبية للجرام على شريحتك.

تقنية تلطيخ سيئة يمكن أن يؤدي إلى نتائج غير دقيقة. واحدة من أهم خطوات صبغ الجرام هي خطوة إزالة اللون (استخدام الكحول / الأسيتون). إذا لم يتم ترك مزيل اللون لفترة كافية ، فلن يكون قادرًا على التمييز بين البكتيريا موجبة الجرام والبكتيريا سالبة الجرام. تستخدم هذه الخطوة مزيل لون مصنوع من خليط كحول / أسيتون. وتتمثل وظيفتها في البكتيريا سالبة الجرام في إزالة غشاء الخلية الخارجي والطبقة الرقيقة من الببتيدوغليكان. يتكون غشاء الخلية في الغالب من الدهون وهو حساس للكحول. من خلال إذابة هذه الطبقات ، تتم أيضًا إزالة مركب اليود البنفسجي الكريستالي ، وبالتالي أصبحت سلبيات الجرام الآن قادرة على تناول البقعة الثانوية ، safranin ، والتي تُستخدم في الخطوة الأخيرة من صبغة غرام ، وتلطيخها باللون الأحمر الوردي وتمييزها. بينهم وبين إيجابيات الجرام ، الذين احتفظوا بطبقة الببتيدوغليكان السميكة بالبقعة الأولية ، البنفسجي الكريستالي ، ويظهر الأرجواني / الأزرق. على الجانب الآخر ، إذا كنت تستخدم الكثير من مزيل اللون ، فيمكنه إزالة لون عينتك على الشريحة ، مما يؤدي إلى فقدان مركب اليود البنفسجي (البقعة الأولية). خطوة إزالة اللون حساسة بسبب بنية جدار الخلية. حتى البكتيريا موجبة الجرام بجدرانها الخلوية السميكة يمكن أن تتلاشى بشكل مفرط ، مما يؤدي إلى فقدان طبقة الببتيدوغليكان ومركب اليود البنفسجي البلوري. عند استخدام الصبغة الثانوية ، safranin ، في الخطوة الأخيرة ، ستلتقط البكتيريا الموجبة لصبغة الجرام هذه البقعة وتبدو باللون الوردي المحمر بدلاً من اللون الأرجواني / الأزرق. شاهد الفيديو 2 للحصول على مثال على ذلك.

خطأ شائع آخر هو تحضير اللطاخة البكتيرية ، وهي الخطوة الأولى من أي إجراء تلطيخ. يتضمن ذلك وضع طبقة رقيقة من البكتيريا على شريحة المجهر الخاصة بك ثم تحديد الحرارة إما مع موقد بنسن ، أو البكتيرية ، أو مدفئ الشرائح. الغرض الرئيسي من هذه الخطوة هو إلصاق الخلايا البكتيرية بشريحة المجهر (كما أنها تفسد البروتينات وتقتلها أيضًا). إذا نسيت القيام بهذه الخطوة ، فسيتم "غسل" الخلايا في جميع الخطوات اللاحقة لعملية التلوين. لن يكون لديك حرفيًا خلايا على شريحتك لتلطيخها!

على الرغم من أن الغالبية العظمى من البكتيريا إما موجبة الجرام أو سالبة الجرام ، فمن المهم أن تتذكر أنه لا يمكن تلطيخ جميع البكتيريا بهذا الإجراء (على سبيل المثال ، الميكوبلازما ، التي ليس لها جدار خلوي ، تلطخ بشكل سيئ بصبغة جرام).

شاهد الفيديو 3: إجراء تلوين غرام

شاهد الفيديو 2: إجراء تلوين غرام ، تم تصويره في مختبرات الأحياء الدقيقة في ولاية نورث كارولاينا. (5:58). عنوان URL: https://youtu.be/H-fxk1be1hQ

البقع الخاصة

هناك مجموعة متنوعة من إجراءات التلوين المستخدمة لتحديد الهياكل الخارجية أو الداخلية المحددة التي لا توجد في جميع الأنواع البكتيرية ، مثل صبغة الكبسولة وصمة السوط. للحصول على صور ومزيد من الأمثلة على البقع المتخصصة ، انظر أدناه وفي القسم التالي ، 4.2 تقنيات التلوين البكتيري المتخصصة.

صبغة الكبسولة

تفرز بعض البكتيريا بنية غنية بالسكريات خارج جدار الخلية تسمى glycocalyx. إذا كان glycocalyx رقيقًا وغير محكم الالتصاق ، يُطلق عليه اسم a طبقة الوحل؛ إذا كانت سميكة ومرتبطة بإحكام بالخلية ، فإنها تسمى a كبسولة. يمكن أن يحمي الكاليكس الخلية من الجفاف ويمكن أن يسمح للخلية بالالتصاق بالأسطح مثل الأنسجة في الجسم. كما أنها قد تزود الخلايا بالحماية من الاكتشاف والبلعمة بواسطة الخلايا المناعية وتساهم في تكوين غشاء حيوي: بهذه الطريقة يمكن أن يعمل جلايكوكاليكس كعامل ضراوة ؛ (يساهم في قدرة الكائن الحي على إحداث المرض).

يمكن الكشف عن الكبسولات باستخدام أ تلطيخ سلبي إجراء يتم فيه تلطيخ الخلفية (الشريحة) والبكتيريا ، ولكن الكبسولة غير ملطخة. تظهر الكبسولة كمنطقة شفافة غير ملوثة حول الخلية البكتيرية. نظرًا لأن الكبسولات تتلف بالحرارة ، فإن إجراء تلطيخ الكبسولة يتم بدون تثبيت البكتيريا بالحرارة.

صبغة الفضة

الأسواط (هياكل طويلة تشبه السوط تستخدم لحركة البكتيريا) وبعض البكتيريا (على سبيل المثال اللولبيات) رقيقة جدًا بحيث لا يمكن ملاحظتها مع إجراءات التلوين المنتظمة. في هذه الحالات ، أ بقعة الفضة يستخدم. يتم تطبيق نترات الفضة على البكتيريا جنبًا إلى جنب مع مادة لاذعة خاصة ؛ تترسب نترات الفضة حول السوط أو البكتيريا الرقيقة ، مما يؤدي إلى تكثيفها بحيث يمكن ملاحظتها تحت المجهر الضوئي.


مقدمة عن تحضير العينة والتصوير بالمجهر الإلكتروني للبيولوجيا الهيكلية

المجهر الإلكتروني للإرسال (EM) هو تقنية متعددة الاستخدامات يمكن استخدامها لتصوير عينات بيولوجية تتراوح من الخلايا حقيقية النواة إلى البروتينات الفردية & # x0003e150 & # x000a0kDa. هناك العديد من الاستراتيجيات لإعداد العينات للتصوير بواسطة EM ، بما في ذلك التلوين السلبي والتجميد المبرد. في السنوات القليلة الماضية ، خضعت cryo-EM لثورة & # x02018resolution & # x02019 ، بسبب كل من التقدم في أجهزة التصوير ، وبرامج معالجة الصور ، والتحسينات في إعداد العينات ، مما أدى إلى زيادة عدد الباحثين الذين يستخدمون cryo-EM كبحث. أداة. ومع ذلك ، لا يزال cryo-EM مجالًا سريع النمو ، مع تحديات فريدة من نوعها. هنا ، نلخص الاعتبارات الخاصة بتصوير مجموعة من العينات من المجمعات الجزيئية إلى الخلايا باستخدام EM.


كتيب موارد الخلايا الجذعية متعددة القدرات

سواء كنت جديدًا في هذا المجال أو تتوسع في مجالات جديدة ، سيوفر لك هذا الكتيب التعليمي كل ما تحتاجه لإجراء بحث ناجح عن الخلايا الجذعية متعددة القدرات (PSC). يوفر دليل موارد PSC أحدث الأدوات والموارد والتطبيقات والمزيد لدعم كل خطوة من خطوات سير عمل PSC.

اطلب نسخة رقمية أو مطبوعة كاملة من الكتيب أو قم بالوصول إلى فصول مختارة باستخدام الروابط أدناه.


حلول تثبيت الملكية

خلال السنوات القليلة الماضية ، كان هناك عدد متزايد من المثبتات المسجلة الملكية المطورة للاستخدام في علم أمراض الأنسجة والأبحاث الطبية. يتم تسويقها بشكل عام على أنها بدائل أقل خطورة لمثبتات الفورمالين التقليدية أو كبدائل أقل سمية للمخاليط المثبتة المحتوية على الزئبق مثل B5.

على الرغم من ضرورة توفير MSDS ، لا يتم عادةً نشر التركيب الدقيق لهذه الكواشف ويجب على المستخدم المحتمل أن يتعامل مع الوصف العام للكاشف. تلك الموصى بها كبدائل لـ B5 و Zenker (والتي تستخدم عادة لإصلاح الأنسجة اللمفاوية والدم) تحتوي عادةً على أملاح الزنك أو الباريوم ونسبة منخفضة من الفورمالديهايد ، بينما تحتوي بدائل الفورمالين المباشرة غالبًا على الجليوكسال ومكونات أخرى. في المجموعة الأخيرة تم العثور على الكواشف الموصى بها للتثبيت بمساعدة الميكروويف (انظر الجزء 5). يتم تضمين الإيثانول والميثانول والأيزوبروبانول في بعض التركيبات. 5

الشكل 2: مثالان على حلول التثبيت الخاصة. وفقًا لما ذكرته الشركة المصنعة ، يوصى باستخدام "Fix-All" المحتوي على الكحول وكلوريد الباريوم و 10٪ فورمالين لتثبيت جميع أنواع الأنسجة وكبديل للزئبق المحتوي على مثبت B-5. يحتوي "O-Fix" على الكحول والفورمالين وحمض الخليك ويمكن استخدامه أيضًا لإصلاح جميع أنواع الأنسجة ولكن يوصى به بشكل خاص لإبراز العقد الليمفاوية أثناء التسلخ.

صبغة جيمسا: المبدأ ، الإجراء ، النتائج

صبغة Giemsa هي نوع من بقع Romanowsky ، سميت على اسم Gustav Giemsa ، الكيميائي الألماني الذي ابتكر محلول الصبغ. تم تصميمه بشكل أساسي لإظهار طفيليات الملاريا في مسحات الدم ، ولكنه يستخدم أيضًا في علم الأنسجة للفحص الروتيني لمسحات الدم.

استخدامات صبغة جيمسا

  • تستخدم صبغة جيمسا للحصول على تعداد خلايا الدم البيضاء التفاضلية.
  • كما أنها تستخدم للتمييز بين التشكل النووي والهيولي لخلايا الدم المختلفة مثل الصفائح الدموية ، كرات الدم الحمراء ، كرات الدم البيضاء.
  • في علم الأحياء الدقيقة ، تستخدم صبغة Giemsa لتلوين الأجسام المتضمنة في المتدثرة الحثرية, بوريليا الأنواع ، وإذا كانت وصمة Wayson غير متوفرة ، وصمة عار يرسينيا بيستيس. وصمة عار جيمسا تستخدم أيضًا للتلطيخ كبسولات الهستوبلازما, المتكيسة الرئوية جيروفيتشي, Klebsiella granulomatis ، Talaromyces marneffei (كانت تسمى سابقًا البنسليوم مارنيفي) وأحيانًا كبسولات بكتيرية.
  • تُستخدم هذه البقعة أيضًا في علم الوراثة الخلوية لتلطيخ الكروموسومات وتحديد الانحرافات الصبغية. يستخدم بشكل شائع في G-banding (Giemsa-Banding)

مبدأ غيمسا ستين

وصمة غيمسا هي بقعة تفاضلية وتحتوي على خليط من اللازوردية والأزرق الميثيلين وصبغة يوزين. إنه خاص بمجموعات الفوسفات في الحمض النووي ويرتبط بنفسه حيث توجد كميات عالية من الترابط بين الأدينين والثيمين.

Azure و eosin عبارة عن صبغة حمضية تلطخ بشكل متفاوت المكونات الأساسية للخلايا مثل السيتوبلازم والحبيبات وما إلى ذلك.

يعمل الميثيلين الأزرق كصبغة أساسية تلطخ المكونات الحمضية ، وخاصة نواة الخلية.

يعمل الميثانول كمثبت وكذلك البقعة الخلوية. لا يسمح المثبت بأي تغيير إضافي في الخلايا ويجعلها تلتصق بالشريحة الزجاجية.

تكوين غيمسا ستين

إجراء

أ. لتحضير البقع في المنزل:

  1. قم بوزن الكمية المطلوبة من مسحوق البقع ، وانقلها إلى زجاجة نظيفة وجافة سعة 1 لتر. يضاف الميثانول ويخلط جيدا.
  2. قم بقياس وإضافة الجلسرين واخلط جيدًا.
  3. ضع زجاجة البقعة في حمام مائي على درجة حرارة 50-60 درجة مئوية أو 37 درجة مئوية لمدة تصل إلى ساعتين مع الخلط المتكرر.
  4. ضع ملصقًا على الزجاجة واحفظها في مكان بارد ومظلم بسدادة ثابتة.

ملاحظة: إذا تلامس الماء أثناء أي خطوات لتحضير البقعة ، فإن البقعة تفسد ، لذلك استخدم ، جفف الأواني الزجاجية وخزنها في ظروف لا يكون فيها ملامسة للماء.

  • قم بتصفية البقعة باستخدام ورق ترشيح Whatman رقم 1 وخفف بالماء المخزن حتى درجة الحموضة 7.2 لعمل حلول عمل

باء لتلطيخ الشرائح

تختلف طريقة تلطيخ وتركيز وتوقيت الصبغة المستخدمة وفقًا للغرض ، على سبيل المثال ، تستخدم مسحات الدم الرقيقة التخفيف بنسبة 1:20 من المخزون بينما يتم استخدام تخفيف لطاخة الدم الكثيفة بنسبة 1:50.

لطخة الدم الرقيقة

  1. قم بإصلاح الفيلم المجفف بالهواء في الميثانول المطلق عن طريق غمس الفيلم لفترة وجيزة (غمسين) في وعاء كوبلين يحتوي على الميثانول المطلق.
  2. أزلها واتركها تجف في الهواء.
  3. وصمة عار مع بقعة جيمسا المخففة (1:20 ، المجلد / المجلد) لمدة 20 دقيقة (للتخفيف 1:20 ، أضف 2 مل من مخزون Giemsa إلى 40 مل من الماء المخزن في وعاء Coplin).
  4. اغسل عن طريق غمس الشريحة لفترة وجيزة داخل وخارج وعاء كوبلين من الماء المخزن (غمس واحد أو اثنين).
    ملحوظة: سيؤدي الغسل المفرط إلى إزالة لون الفيلم.
  5. دع الهواء يجف في وضع عمودي. لاحظ تحت المجهر أولاً عند 40X ثم باستخدام عدسة الغمر بالزيت

لمسحات الدم السميكة

  1. اترك الفيلم يجف تمامًا في الهواء لعدة ساعات أو طوال الليل. لا تجفف الأغشية في الحاضنة أو بالحرارة ، لأن ذلك سيثبت الدم ويتداخل مع تفتيت كرات الدم الحمراء.
    ملحوظة: إذا كانت هناك حاجة إلى تشخيص سريع للملاريا ، فيمكن جعل الأغشية السميكة أرق قليلاً من المعتاد ، وتركها تجف لمدة ساعة واحدة ، ثم تلطخ.
  2. لا تصلح.
  3. وصمة عار مع بقعة جيمسا المخففة (1:50 ، حجم / حجم) لمدة 50 دقيقة (للتخفيف 1:50 ، أضف 1 مل من مخزون Giemsa إلى 50 مل من الماء المخزن في برطمان Coplin)
  4. اغسل عن طريق وضع الفيلم في الماء المخزن لمدة 3 إلى 5 دقائق.
  5. دع الهواء يجف في وضع عمودي ولاحظ تحت المجهر أولاً عند 40X ثم باستخدام عدسة الغمر بالزيت

ل المتدثرة الحثرية

اتبع الخطوات المذكورة أعلاه ولكن مع تخفيف البقعة 1:40 (أضف 0.5 مل من محلول Giemsa إلى 19.5 مل من الماء المخزن) واترك البقعة لمدة 90-120 دقيقة.


ما هي المقابلات التحفيزية؟

نشاط التعلم في مكان العمل

يرجى قراءة مقال "ما هي المقابلة التحفيزية؟" (Rollnick and Miller، 1995) قبل الإجابة على الأسئلة التالية:

سؤال - فكر في النقاط الواردة في المقال تحت العنوان الفرعي "روح المقابلة التحفيزية". كيف تقارن هذه الأفكار بعملك الحالي مع الشباب؟

سؤال - كيف يمكن استخدام المقابلات التحفيزية في عملك مع الشباب؟


غرام وصمة عار

سيراجع محررونا ما قدمته ويحددون ما إذا كان ينبغي مراجعة المقالة أم لا.

غرام وصمة عار، وهي تقنية تلطيخ ميكروبيولوجية مستخدمة على نطاق واسع تساعد بشكل كبير في تحديد وتوصيف البكتيريا. ابتكره الطبيب الدنماركي هانز كريستيان غرام في عام 1884. يعكس تفاعل غرام الاختلافات الأساسية في الخصائص الكيميائية الحيوية والهيكلية للبكتيريا. يتم معالجة شريحة تحتوي على مسحة ثابتة من الخلايا البكتيرية باستخدام صبغة بنفسجية بلورية (صبغة أساسية) ، حيث تتحول الخلايا خلالها إلى اللون الأرجواني. يتم بعد ذلك شطف الشريحة بمحلول اليود ، متبوعًا بمذيب عضوي (مثل الكحول أو الأسيتون). تبقى البكتيريا موجبة الجرام أرجوانية لأن لها جدارًا خلويًا سميكًا واحدًا لا يمكن اختراقه بسهولة بواسطة البكتيريا سالبة الجرام المذيبة ، ومع ذلك ، يتم إزالة اللون لأنها تحتوي على جدران خلوية ذات طبقات أرق بكثير تسمح بإزالة الصبغة بواسطة المذيب. في خطوة أخيرة ، تتم إضافة صبغة مضادة ، مثل السافرانين ، وتلطيخ الخلايا سالبة الجرام باللون الأحمر.

محررو Encyclopaedia Britannica تمت مراجعة هذه المقالة وتحديثها مؤخرًا بواسطة Adam Augustyn ، مدير التحرير ، المحتوى المرجعي.


مقدمة

سرطان الغدد الليمفاوية البلازمية (PBL) هو كيان إكلينيكي تم وصفه في البداية في عام 1997 1 ويعتبر الآن نوعًا فرعيًا متميزًا من ورم الغدد الليمفاوية B- الخلية الكبيرة المنتشرة (DLBCL) التي تُرى بشكل أكثر شيوعًا في المرضى المصابين بعدوى فيروس العوز المناعي البشري. 2 في التقرير الأصلي الذي أعده Delecluse وزملاؤه ، أصيب 15 من 16 مريضًا بفيروس نقص المناعة البشرية ، وكان 1 مريضًا مسنًا ، وكان جميع المرضى مصابين بتجويف الفم. في العقد الماضي ، تم نشر العديد من تقارير الحالات وسلسلة الحالات حول التعليم القائم على المشاريع (PBL) بين الأفراد المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية وغير المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية. 3-7 ومع ذلك ، لم يتم إجراء دراسات مستقبلية.

يعد تشخيص PBL أمرًا صعبًا لأنه يحتوي على ميزات تتداخل مع تلك الموجودة في الورم النقوي والأورام اللمفاوية التي تحتوي على مورفولوجيا plasmablastic. يكشف هذا التعقيد أنه لا يمكن تصنيف PBL بسهولة على أنها ورم الغدد الليمفاوية B أو ورم خلايا البلازما. يتفاقم التحدي المتمثل في تشخيص هذا المرض من خلال مساره السريري العدواني والانعكاسي ، والذي يشكل تحديات إدارية وعلاجية ، وكذلك بسبب ارتفاع معدلات تطور المرض والوفيات على الرغم من استخدام طرق العلاج الحديثة. 8 نظرًا لندرتها ، لم يتم وضع معيار رعاية لـ PBL. ومع ذلك ، مع فهم أفضل لبيولوجيا التعلُّم البيولوجي في PBL ، هناك وعد بتحسين النتائج.

في هذه المقالة ، أضفنا إلى خبرتنا في تشخيص وإدارة مرضى PBL من خلال إجراء مراجعة شاملة للأدبيات التي تضمنت المعلومات الوبائية ، والتسبب المرضي ، والسمات السريرية والمرضية ، والعوامل الإنذارية ، والنتائج ، والخيارات العلاجية الناشئة لمرضى PBL.


أكسيد النيتريك ، الجزء G الإجهاد التأكسدي والتآكل في تنظيم الأكسدة والاختزال لإشارات الخلية

أورازيو كانتوني ،. ليانا سيريوني ، طرق في علم الإنزيمات ، 2008

2.2 مقايسة السمية الخلوية

يتم تحديد السمية الخلوية بمقايسة استبعاد التريبان الأزرق مباشرة بعد العلاج. باختصار ، قسامة (50 ميكرومترل) من تعليق الخلية مخفف بنسبة 1: 1 (ت / ت) مع 0.4 ٪ من التريبان الأزرق ويتم حساب الخلايا القابلة للحياة باستخدام مقياس الكريات. لاحظ أن العلاجات السامة المستخدمة في هذه الدراسة تقلل من عدد الخلايا القابلة للحياة دون زيادة موازية في عدد الخلايا الموجبة لأزرق التريبان ، لأن تحلل الخلايا سريع جدًا. في الواقع ، تظل هذه الخلايا قابلة للحياة لمدة لا تقل عن 30 إلى 40 دقيقة ثم تخضع لعملية تستغرق حوالي 3 إلى 5 دقائق حيث تنتفخ أولاً ثم تفقد سلامة غشاءها وتلاشيها بسرعة.


مطيافية الامتصاص المرئي للأشعة فوق البنفسجية ، تطبيقات الجزيئات الحيوية

مقايسة ملزمة صبغة زرقاء Coomassie

تتضمن طريقة تحديد البروتين هذه ربط Coomassie الأزرق اللامع G-250 بالبروتين. الشكل البروتوني لأزرق كوماسي هو لون برتقالي أحمر شاحب بينما الشكل غير المشبع (الشكل 6) أزرق. عندما ترتبط البروتينات بـ Coomassie blue في المحلول الحمضي ، تعمل الشحنات الإيجابية على تثبيط البروتون ونتائج اللون الأزرق. يؤدي ارتباط الصبغة بالبروتين إلى حدوث تحول في الحد الأقصى لامتصاص الصبغة من 465 إلى 595 نانومتر ويتم رصد الزيادة في الامتصاص عند 595 نانومتر. الفحص قابل للتكرار وسريع للغاية مع اكتمال عملية ربط الصبغة فعليًا في أقل من 2 دقيقة مع استقرار جيد للون.

يتم تحضير الكاشف على النحو التالي. يذاب Coomassie الأزرق اللامع G-250 (100 مجم) في إيثانول 50 سم 3 95 ٪. يضاف إلى هذا المحلول حامض الفوسفوريك (100 سم 3 ، 85٪ وزن / حجم) ويخفف المحلول إلى 1 دسم 3. لإجراء الفحص ، x يتم وضع سم 3 من العينة التي تحتوي على 5-100 ميكروغرام من البروتين في أنبوب اختبار نظيف وجاف. الماء (0.5–x) سم 3 و 5.0 سم 3 من كاشف الصبغة المخفف ويخلط المحلول جيداً. بعد فترة 5-60 دقيقة ، أ595 يتم تحديد.

المركبات الوحيدة التي تم العثور عليها لإعطاء لون تداخل زائد في الفحص هي كميات كبيرة نسبيًا من المنظفات مثل كبريتات دوديسيل الصوديوم ، تريتون X-100 والمنظفات التجارية للأواني الزجاجية. يمكن القضاء على التداخل بكميات صغيرة من المنظف باستخدام أدوات التحكم المناسبة. المقايسة غير خطية وتتطلب منحنى قياسي.


شاهد الفيديو: علم الأحياء مقدمة في علم البيئة (قد 2022).


تعليقات:

  1. Zologor

    هذا صحيح! انا اعتقد انها فكرة جيدة.

  2. Jafari

    اني احبها جدا!

  3. Avshalom

    أحب هذا

  4. Ahane

    الموضوع بلا حدود

  5. Darryn

    آسف لأنني أقاطعك ، أود أيضًا التعبير عن رأيك.



اكتب رسالة