معلومة

تلقيح ألواح أجار بالميكروبات المعلقة في الماء المعقم؟

تلقيح ألواح أجار بالميكروبات المعلقة في الماء المعقم؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

كنا نواجه مشكلة في تجربتنا (زراعة الميكروبات على أجار المغذيات محلية الصنع) لذلك قررنا تغيير طريقة تركيبنا. لقد كلفنا بالفعل بعض المال. لذلك ، رأينا هذا الإجراء. يمكن لأي شخص أن يقول ما إذا كان هذا شرعي؟ شكرا لك!


سيكون من الرائع أن تتمكن من تقديم المزيد من المعلومات فيما يتعلق بما قمت به بالفعل وما هي المشاكل التي لاحظتها. ما قيل، نعم، يجب أن يعمل "البروتوكول" الذي وجدته.

أفترض أن هذا نوع من الواجب المنزلي / مشروع مدرسي ، لذا فأنت لا تحتاج في الواقع إلى معرفة الكائنات الحية التي تقوم بتلقيحها وعلى أي مستويات.

شيء واحد أود أن أوصي به هو أنه عند أخذ عينة المسحة ، قم بتبليل المسحة عن طريق غمسها في الماء المعقم أولاً ثم مسح منطقة محددة مسبقًا بحوالي 10 سم × 10 سم (4 بوصة × 4 بوصة) جيدًا قبل إعادة المسحة مرة أخرى إلى أنبوب اختبار. بمجرد العودة إلى أنابيب الاختبار ، تأكد من تدوير المسحة لمدة كافية من الوقت (حوالي 30 ثانية) واضغط بالممسحة على الجزء الداخلي من أنبوب الاختبار للسماح بنفاد أكبر قدر ممكن من السائل من المسحة. الخطوة الأخيرة مهمة من أجل تعظيم إنتاجية البكتيريا والخمائر والعفن التي قد تجدها في عينتك.


العمل العملي للتعلم

ملاحظات تستند إلى المعلومات الواردة في "علم الأحياء الدقيقة العملي الأساسي" © Society for General Microbiology.

الرجوع إلى الإجراء القياسي تقنيات التعقيم قبل البدء في هذا أو أي عمل عملي آخر في علم الأحياء الدقيقة.

يجب أن تؤدي لوحات الانتشار أو "العشب" إلى نمو ثقيل ومتجمع في كثير من الأحيان للثقافة المنتشرة بالتساوي على سطح وسط النمو. هذا يعني أنه يمكن استخدامها لاختبار حساسية البكتيريا للعديد من المواد المضادة للميكروبات ، مثل غسول الفم والثوم والمطهرات والمضادات الحيوية.

في بعض الحالات ، تكون لوحة الصب أفضل للعمل مع مضادات الميكروبات ، حيث من الضروري أن يكون لديك وقت لتجف تمامًا قبل إضافة أي مواد أخرى ، مثل الأقراص الورقية المنقوعة في مضادات الميكروبات.

يمكن استخدام لوحة الانتشار للعمل الكمي (تحسب المستعمرة - لكن انظر ملاحظة 1). إذا كان التخفيف وحجم اللقاح معروفين (الحجم عادة 0.1 سم 3) ، يمكنك تحديد العدد القابل للتطبيق للعينة. العد القابل للتطبيق هو عدد البكتيريا أو كتل البكتيريا لكل سم 3. يمكنك تحديد العدد القابل للتطبيق إذا كان التخفيف الذي اخترته ينتج ما بين 30 و 100 مستعمرة منفصلة قابلة للعد.

الصحة و أمبير السلامة والملاحظات الفنية

1 تستخدم الموزعات المعقمة لتوزيع اللقاح على سطح ألواح الأجار المحضرة. يمكنك تعقيم رشاش الزجاج الملفوف في فرن الهواء الساخن أو تعقيمه باللهب بالكحول.

2 لإشعال النار في رشاش بالكحول:
أ قم بغمس الطرف السفلي من الموزع في حجم صغير من الكحول (70٪ IDA) الموجود في وعاء بغطاء (إما غطاء لولبي أو ورق ألومنيوم) أو في طبق زجاجي (غير بلاستيكي) بغطاء. احتفظ بوعاء الكحول مغطى وعلى بعد متر واحد من لهب موقد بنسن.

ب تمر بسرعة من خلال لهب موقد بنسن لإشعال الكحول. تأكد من أن الموزعة تشير إلى الأسفل عند وبعد إشعال الكحول لتجنب حرق نفسك.

ج قم بإزالة الموزعة من اللهب واترك الكحول يحترق. سيعقم الكحول المحترق الزجاج.

د لا تضع الموزعة على المقعد.

3 يمكن استخدام مسحات القطن بدلاً من الموزعات الزجاجية. قد تكون مفضلة لأنها تتجنب الحاجة إلى استخدام الكحول كعامل تعقيم. قم بإعدادهم عن طريق لف قطع صغيرة من الصوف القطني الماص حول أحد طرفي عود كوكتيل. قم بلفها بشكل فردي بورق الألمنيوم أو ضعها داخل زجاجة يونيفرسال للتعقيم في الأوتوكلاف أو قدر الضغط. يمكن بعد ذلك غمس هذه المسحات المعقمة في المحلول أو المزرعة المراد نقلها ، وفركها على سطح صفيحة الأجار ، والتخلص منها فورًا في المطهر. (ملاحظة: أعواد القطن من الصيدلي ليست معقمة ويمكن تشريبها بعامل مضاد للميكروبات.)

4 استخدم ألواح الأجار ذات السطح المجفف جيدًا حتى يجف اللقاح بسرعة. قم بتجفيف سطح ألواح الأجار عن طريق الحضانة لعدة ساعات (ربما بين عشية وضحاها) أو وضعها في فرن الهواء الساخن (عند 55-60 درجة مئوية) لمدة 30-60 دقيقة مع فصل النصفين وتوجيه الأسطح الداخلية إلى الأسفل.

5 يقترح القسم 15.2.12 من كتيب مختبر CLEAPSS بعض الطرق البديلة لعمل لوح مائل أو العشب ويأخذ في الاعتبار مزاياها وعيوبها.

6 طريقة القطرة المُعايرة (Miles & amp Misra) لتعداد مستعمرات الثقافات النقية للبكتيريا والخميرة هي طريقة اقتصادية أكثر من صب أو نشر الألواح. ومع ذلك ، فإن طريقة Miles & amp Misra ليست مناسبة عادة للزراعات المختلطة التي تم الحصول عليها من عينات طبيعية مثل التربة. الإجراء ينطبق على لوحة الانتشار ، ولكن هناك حاجة إلى عدد أقل من اللوحات للأسباب التالية:

  • يتم تسليم اللقاح كقطرات من ماصة إسقاط يتم معايرتها (حسب القطر الخارجي للطرف) لتوصيل قطرات من الحجم المقاس (على سبيل المثال ، 0.02 سم 3)
  • يمكن وضع العديد من القطرات (ستة أو أكثر) على طبق واحد.

إجراء

تحضير

أ قم بفك غطاء الزجاجة / أنبوب الاختبار الذي يحتوي على ثقافة المرق.

ب أزل ماصة باستور المعقمة من عبوتها واربط الحلمة بيدك اليمنى.

ج أمسك الماصة المعقمة في يدك اليمنى والزجاجة / أنبوب الاختبار الذي يحتوي على ثقافة المرق في يسارك.

د قم بإزالة الغطاء / سدادة الصوف القطني للزجاجة / أنبوب الاختبار بإصبع اليد اليمنى وشعل الرقبة.

ه اعصر حلمة الماصة واسحب كمية صغيرة من المرق.

F قم بإشعال عنق الزجاجة / أنبوب الاختبار واستبدل الغطاء / السدادة.

ز باستخدام يدك اليسرى ، ارفع جزئيًا غطاء طبق بتري يحتوي على وسط غذائي صلب.

ح ضع بضع قطرات من المزرعة على السطح - حوالي 0.1 سم 3 / حوالي 5 قطرات /
يكفي لتغطية قطعة 5 بنس.

أنا استبدل غطاء طبق بتري.

ي ضع الماصة في وعاء التخلص من المطهر.

ك قم بغمس رشاش زجاجي في الكحول (70٪ IDA) واللهب واترك الكحول يحترق (ملاحظة 2).

ل ارفع غطاء طبق بتري للسماح بدخول الموزعة.

م ضع الموزعة على سطح أجار الملقح. حرك الموزعة بحركة من أعلى إلى أسفل أو من جانب إلى آخر لنشر اللقاح على سطح أجار. تأكد من تغطية سطح أجار بالكامل.

ن استبدل غطاء طبق بتري.

ا اللهب الموزعة باستخدام الكحول (ملاحظة 2).

ص دع اللقاح يجف (ملاحظة 4). سيستغرق هذا بعض الوقت.

ف إذا لم يتم تصنيع اللوحة لتقييم السكان في التخفيف المتسلسل ، فيمكن الآن معالجتها بشكل أكبر ، على سبيل المثال ، لاختبار مضادات الميكروبات ، قبل التسجيل والحضانة.

ص أغلق الصفيحة وقم باحتضانها في وضع مقلوب.

روابط انترنت

موارد معلم الأحياء الدقيقة
جمعية علم الأحياء الدقيقة العام - مصدر علم الأحياء الدقيقة العملي الأساسي ، دليل ممتاز للتقنيات المعملية وعلم الأحياء الدقيقة العملي للمدارس الثانوية ، مجموعة مختارة من التطبيقات العملية المجربة والمختبرة باستخدام الكائنات الحية الدقيقة.

علم الأحياء الدقيقة على الإنترنت
يتم دعم MiSAC (اللجنة الاستشارية لعلم الأحياء الدقيقة في المدارس) من قبل جمعية علم الأحياء الدقيقة العامة (انظر أعلاه) وتتضمن مواقع الويب الخاصة بهم مزيدًا من معلومات السلامة ورابطًا لطلب النصيحة عبر البريد الإلكتروني.

(تم الوصول إلى المواقع الإلكترونية في أكتوبر 2011)

© 2019 ، الجمعية الملكية لعلم الأحياء ، 1 شارع ناوروجي ، لندن WC1X 0GB جمعية خيرية مسجلة رقم 277981 ، تأسست بموجب الميثاق الملكي


عملية التلقيح في الكائنات الحية الدقيقة | علم الاحياء المجهري

يتم تحضير فتحات أجار (الشكل 16.11) لتلقيح الثقافة الميكروبية. لتحضير مائل أجار ، يتم أخذ العدد المطلوب من أنابيب الاستزراع ويتم سكب حوالي 12 إلى 15 مل من وسط أجار سائل في كل منها. يتم الآن توصيل الأنابيب بالقطن وتعقيمها في الأوتوكلاف.

بعد التعقيم ، يتم إخراج الأنابيب ووضعها في وضع مائل (مائل) في بعض الأحيان يتم تبريد الأنابيب ويتم ترسيخ الوسط الموجود فيها مما يؤدي إلى سطح مائل.

الإجراء (الشكل 16.12):

يتم وضع الأنبوب الذي يحتوي على اللقاح والأنبوب الذي يحتوي على مائل الأجار في اليد اليسرى وحلقة التلقيح / الإبرة في اليد اليمنى. يجب أن تكون الأنابيب موازية للأرض تقريبًا لتجنب التلوث.

II. يتم فتح كلا الأنبوبين عن طريق إزالة السدادة القطنية بأصابع اليد اليمنى ويتم تعقيم الفم المفتوح للأنابيب بالمرور عبر اللهب مرتين.

ثالثا. مباشرة بعد فك انسداد وتعقيم فم الأنابيب ، يتم أيضًا تعقيم الحلقة / الإبرة باللهب ويتم إدخالها داخل سطح أجار من اللقاح الذي يحتوي على أنبوب لإخماد الحرارة ، ويتم أخذ جزء صغير من اللقاح على الحلقة / طرف إبرة.

رابعا. يتم إخراج اللقاح الذي يحتوي على حلقة / إبرة وإدخاله داخل أنبوب يحتوي على مائل أجار حيث يتم فرك اللقاح على سطح مائل الأجار.

5. يجب اتخاذ جميع الخطوات بدءًا من إزالة السدادة من فم الأنابيب إلى فرك اللقاح على سطح مائل الأجار بسرعة لتجنب التلوث.

السادس. عند اكتمال التلقيح ، يتم تعقيم الأفواه المفتوحة للأنابيب والسدادات القطنية باللهب واستبدال السدادات القطنية.

سابعا. يتم تحضين الأنبوب الملقح تحت درجة حرارة مناسبة لتعزيز النمو السريع للكائنات الحية الدقيقة.


ثقافة الكائنات الدقيقة: 5 خطوات

توضح النقاط التالية الخطوات الخمس الرئيسية لاستنبات الكائنات الحية الدقيقة. الخطوات هي: 1. إعداد الوسائط 2. تعديل درجة الحموضة للوسائط 3. إعداد الطعنات والفتحات 4. صب الألواح 5. تلقيح البكتيريا في فتحات المغذيات وألواح الأجار.

الخطوة رقم 1. إعداد وسائل الإعلام:

عند إعداد وسط استزراع لأي كائن حي دقيق ، فإن الهدف الأساسي هو توفير مزيج متوازن من العناصر الغذائية المطلوبة ، بتركيزات تسمح بنمو جيد. لا ينبغي إعطاء أي عنصر زائد لأن العديد من العناصر الغذائية تصبح مثبطة للنمو أو سامة مع زيادة التركيز.

يُطلق على الوسط المكون بالكامل من العناصر الغذائية المحددة كيميائيًا اسم الوسط الصناعي. يُطلق على النوع الذي يحتوي على مكونات ذات تركيبة كيميائية غير معروفة وسيطًا معقدًا. لأغراض مختلفة في المختبر ، يتم استخدام الوسائط إما & # 8216solid & # 8217 أو & # 8216l Liquid & # 8217.

أ. الوسائط السائلة أو المرق:

مرق المغذيات هو أساس معظم الوسائط المستخدمة في دراسة أنواع مختلفة من الميكروبات. وهي من أهم الوسائط السائلة المستخدمة للأغراض البكتريولوجية.

(ط) قارورة & # 8211 سعة 1000 مل.

(2) أسطوانة مدرجة & # 8211500 مل.

(3) مستخلص لحم البقر ، البكتوببتون ، الماء المقطر.

(4) صندوق التوازن والوزن.

(v) ورق الأس الهيدروجيني ، كتلة المقارنة ، 0.1 (N) هيدروكسيد الصوديوم و 0.1 (N) HCl soln.

لعمل 300 مل من مرق المغذيات: & # 8211

0.9 جرام من خلاصة اللحم البقري و 1.5 جرام من البكتوببتون يتم وزنها بشكل منفصل وتؤخذ في دورق مخروطي الشكل. ثم 300 مل توزيع. يضاف الماء وتخلط المكونات جيدًا. يتم ضبط الأس الهيدروجيني ويخجل بإضافة القليل من القلويات (محلول هيدروكسيد الصوديوم). يتم بعد ذلك توصيل القارورة بقطن الصوف وتعقيمها بوزن 15 رطلاً. الضغط لمدة 15 دقيقة.

2. مرق البطاطا الدكستروز:

إنه نوع من المواد شبه الاصطناعية والشيوم. غالبًا ما يستخدم هذا في وسط نمو الفطريات التي تنمو بشكل أفضل في مرق البطاطس الدكستروز مقارنةً بمرق المغذيات.

بطاطس مقشرة طازجة & # 8211400 جم. (40٪)

(2) أسطوانة مدرجة & # 8211 250 مل.

(3) البطاطا وسكر العنب والماء المقطر.

(4) المتطلبات الأخرى كما في تحضير المرق السابق.

لتحضير 200 مل من المرق:

يتم وزن 80 جرامًا من البطاطس المقشرة حديثًا و 5 جرام من سكر العنب وتؤخذ في دورق مخروطي الشكل. 200 مل توزيع. يُسكب الماء في القارورة وتُخلط المكونات جيدًا بواسطة قضيب زجاجي. (في الواقع يتم غلي البطاطس المقشرة في دورق باستخدام 100 مل من الماء لمدة 10 دقائق ويتم أخذ المستخلص عن طريق الصب). يتم توصيل القارورة وتعقيمها بوزن 15 رطلاً. الضغط لمدة 15 دقيقة.

ب. صلب أو متوسط ​​أجار:

أجار المغذيات هو وسيط مهم للأغراض البكتريولوجية. إنه ببساطة مرق مغذي مقوى بإضافة أجار. نظرًا لاتساقها القوي ، تعمل هذه الوسيلة كأداة جيدة لاستنبات البكتيريا على سطح صلب.

الببتون البكتريولوجي & # 8211 5 جرام. (0.5٪)

ب) أسطوانة متدرجة & # 8211500 مل.

ج) مستخلص اللحم البقري ، البكتوببتون ، الأجار ، والماء المقطر.

رابعا) صندوق التوازن والوزن.

ت) ورقة الأس الهيدروجيني ، كتلة المقارنة 0.1 (N) حمض الهيدروكلوريك و 0.1 (N) هيدروكسيد الصوديوم محلول.

لعمل 500 مل من أجار المغذيات:

7.5 جرام. من مسحوق أجار يزن ويؤخذ في دورق يحتوي على 250 مل من الماء المقطر. ثم يتم تسخين المحتوى في حمام مائي للسماح للأجار بالذوبان. في دورق آخر يتم إذابة 1.4 جرام من مستخلص اللحم البقري و 2.5 جرام من الببتون في 250 مل من الماء المقطر. ثم يتم تعديل الأس الهيدروجيني وفحصه بورق الأس الهيدروجيني.

يُسكب المحلولان بعد ذلك في دورق سعة 500 مل ، ويُقلب جيدًا ثم يُسخن برفق. ثم يتم الاستغناء عن الوسيط في أنابيب الاستزراع والقوارير المخروطية (حيث يتم تعقيم وسط استزراع المخزون عند ضغط 15 رطلاً لمدة 15 دقيقة بعد توصيل الأنابيب والقارورة).

2. البطاطس - دكستروز - أجار (P.D.A.):

غالبًا ما يستخدم وسط البطاطس وسكر العنب أجار في زراعة الفطريات. إنه ببساطة مرق دكستروز البطاطس المقوى بإضافة أجار.

بطاطس مقشرة طازجة & # 8211400 جم. (40٪)

(2) أسطوانة مدرجة & # 8211500 مل.

(3) مستخلص لحم البقر ، وبكتوببتون ، وأجار ، والماء المقطر.

(4) صندوق التوازن والوزن.

(v) ورق الأس الهيدروجيني ، كتلة المقارنة 0.1 (N) HCl و 0.1 (N) NaOH soln.

لصنع 300 مل من P.D.A .: & # 8211

4.5 جرام من أجار يؤخذ في دورق يحتوي على 150 مل من الماء المقطر. يتم تسخين المحتوى في حمام مائي لإذابة الأجار. تؤخذ 120 جرام من البطاطس الطازجة في دورق ويضاف إليها 150 مل من الماء. يغلي لمدة 10 دقائق. ثم يتم أخذ مستخلص البطاطس هذا ويصل حجمه إلى 150 مل عن طريق إضافة الماء. يضاف إلى هذا المستخلص 7.5 جرام من سكر العنب ويخلط بشكل خجول.

الآن يسكب المحلولان أعلاه في دورق سعة 500 مل ويقلب جيدًا. يتم الاستغناء عن هذه الوسيلة في أنابيب وقوارير الاستزراع. يتم توصيل الأنابيب والقوارير (الشكل 2.1) وتعقيمها.

(ط) يجب تسييل أجار بشكل صحيح قبل خلطه بالمرق.

(2) يجب ألا يتم تسخين Agar أكثر من اللازم وبخجل سوف يفقد قدرته على التصلب.

(3) يجب أن يتم الاستغناء بسرعة ، وإلا فإن الأجار سوف يصلب.

ويرد في الملحق قائمة مفصلة بتكوين الوسائط المختلفة.

الخطوة رقم 2. تعديل درجة الحموضة للوسائط:

مبدأ:

يعتبر تركيز أيون الهيدروجين لوسائط الاستنبات ذا أهمية قصوى لنجاح زراعة البكتيريا. تنمو بعض الأنواع بشكل أفضل في الوسط الحمضي ، والبعض الآخر في الوسط القلوي لا يزال البعض الآخر يفضل الركائز المحايدة في التفاعل. تركيز H + أي

لذلك ، من أجل نمو كائن حي كبير ، يجب أن يكون للوسيط درجة حموضة معينة. لضبط درجة الحموضة ، يتم استخدام الأحماض والقلويات.

متطلبات:

(2) ورق الأس الهيدروجيني ومعيار الألوان

(4) 0.1 (N) هيدروكسيد الصوديوم و 0.1 (N) حمض الهيدروكلوريك محلول.

إجراء:

أبسط طريقة لتحديد درجة الحموضة في soln. هو استخدام ورق الأس الهيدروجيني المتاح تجاريًا والذي يتم تشريبه بمؤشر. هذا الأخير يعطي تغيير اللون على مدى درجة الحموضة من 6.4 إلى 8.2. يتم تقطيع شريط من ورق الأس الهيدروجيني إلى قطع صغيرة ويتم وضع كل قطعة داخل بئر على كتلة المقارنة.

بمساعدة قضيب زجاجي ، يتم سحب قطرة من الوسط ووضعها على قطعة من ورق الأس الهيدروجيني. تتم مقارنة اللون الناتج مع معيار اللون المزود.

يتم إحضار الأس الهيدروجيني للوسط ، إذا وجد أنه حمضي ، إلى الرقم الهيدروجيني المطلوب عن طريق إضافة 0.1 (N) هيدروكسيد الصوديوم بالتنقيط واختباره بورق الأس الهيدروجيني بعد خلطه جيدًا بقضيب زجاجي. على العكس من ذلك ، يتم استخدام 0.1 (N) HCl للحصول على درجة الحموضة الحمضية للوسط.

احتياطات:

(ط) أثناء تحييد المرق ، يجب إضافة حمض أو قلوي بالتنقيط.

(2) بعد إضافة الحمض أو القلوي ، يجب تقليب الوسط لضمان الخلط المناسب للحمض أو القلوي المضاف.

(3) في كل خطوة ، يجب ملاحظة تفاعل اللون.

الخطوة رقم 3. تحضير الطعنات والمنحدرات:

إجراء:

من أجل تحضير الطعنات ، يتم سكب الوسط حتى نصف أنبوب الاستزراع (حوالي 20 مل) ، ثم يتم توصيله بعناية وتعقيمه في الأوتوكلاف. بعد التعقيم ، يتم الاحتفاظ بأنبوب الاستنبات منتصبًا في حامل أنبوب الاختبار حتى يصلب الوسط. ثم يتم جمعها في سلة شبكية وحفظها.

من أجل أن تحضر & # 8220slants & # 8221 يتم أخذ الوسط حتى ربع أنبوب الثقافة (حوالي 7 مل) بمساعدة اسطوانة قياس وقمع. ثم يتم توصيل أنابيب الاستزراع وتعقيمها بالبخار المضغوط. بعد التعقيم ، قبل ضبط الوسط ، تنحدر الأنابيب على مقعد عن طريق إمالتها على طول عصا خشبية بسمك 1/2 & # 8243 بحيث لا يلمس الوسيط السدادة.

يتم الاحتفاظ بأنابيب الاستزراع في هذا الوضع حتى يصلب الوسط. بعد تجميد الوسيط ، يتم جمع & # 8220slants & # 8221 في سلة شبكية سلكية وحفظها مع ملصق يشير إلى تاريخ التحضير وطبيعة الوسط (الشكل 2.2).

احتياطات:

(ط) يجب توصيل أنابيب الثقافة بقطن غير ماص.

(2) وتجدر الإشارة إلى أنه أثناء الاستغناء ، لا يلتصق الوسيط بجوانب أنابيب الثقافة.

(3) أثناء الميل ، يجب توخي الحذر للتأكد من أن الوسيط لا يلمس القابس.

(4) يجب أن يتم الطعن أو الميل مباشرة قبل التصلب ، أي عند حوالي 47 درجة مئوية ، وإلا سيكون هناك ماء داخل المنحدر.

(5) لا ينبغي إزعاج الطعنات والمنحدرات قبل تصلب الوسط.

الخطوة رقم 4. صب الأطباق:

مبدأ:

تتكون ثقافة اللوحة من كائن حي ينمو على وسط صلب يحتوي على نبات بتريديش. & # 8220 سكب الأطباق & # 8221 يشير إلى عملية صب أجار المغذيات المذابة في البتريدس. من خلال هذه العملية ، يتم إنشاء مساحة أكبر لنمو الميكروبات في جميع الاتجاهات.

متطلبات:

(ط) أجار المغذيات & # 8220stab & # 8221 أو متوسط ​​في القارورة.

(2) بتريديس معقمة.

(4) قطن ماص ، وروح مصححة ، وقلم رصاص زجاجي ، إلخ.

إجراء:

يتم إذابة الوسط الصلب الموجود في أنابيب أو قوارير الاستزراع في حمام مائي. بمجرد ذوبان الأجار تمامًا ، يُسمح للوسيط أن يبرد حوالي 45 درجة مئوية. يتم تنظيف وتعقيم طاولة العمل بقطن مبلل بروح مصححة. يتم تعقيم الأيدي أيضًا بالروح المصححة.

يتم فتح السدادة القطنية للأنبوب أو القارورة المنصهرة بالقرب من اللهب ويتم حرق فوهة الأنبوب / القارورة في وضع شبه أفقي. باستخدام اليد اليسرى ، يتم رفع غطاء نبات البتريش بعيدًا بدرجة كافية للسماح بدخول فم الأنبوب أو القارورة دون لمس الجوانب.

يُسكب حوالي 15 مل من الوسط بسرعة وبعناية في البتريد ، ويسحب الأنبوب / القارورة ويستبدل الغطاء أو الغطاء. يميل البتريش قليلاً مع حركة المعصم للسماح بالانتشار المتجانس للوسط (الشكل 2.3). عندما يصلب الوسط ، يتم تحضين الألواح عند 30 درجة مئوية في وضع مقلوب ، أي رأسًا على عقب بحيث لا يسقط انخفاض الرطوبة على الوسط.

احتياطات:

(ط) يجب القيام بكل العمل بطريقة معقمة.

(2) بعد التصلب ، يجب أن تظل الألواح مقلوبة.

(3) أثناء الصب ، يجب ملاحظة أن فم الأنبوب / القارورة لا يلمس أي جزء من البتريش.

الخطوة رقم 5. تلقيح البكتيريا في فتحات المغذيات وألواح أجار:

المواد المطلوبة:

(ط) المنحدرات المغذية وألواح أجار المغذيات.

(4) ميل الثقافة البكتيرية:

طريقة:

أولاً ، يتم تعقيم إبرة التلقيح (الشكل 2.4) عن طريق التسخين بقوة في اللهب وتبريدها عن طريق وضعها خارج اللهب. بعد تبريد الإبرة بشكل أكبر عن طريق لمسها على وسيط & # 8216 إضافي & # 8217 (حيث لا يوجد نمو) في الفتحات الموردة ، يتم إخراج كمية صغيرة جدًا من اللقاح عن طريق الإبرة ثم يتم تلقيحها في الفتحات المعدة مسبقًا في بطريقة متعرجة.

يتم تلقيح كل مزرعة بكتيرية في نسختين. ثم يتم حرق الإبرة باللهب لضمان قتل البكتيريا الموجودة في الإبرة. (الشكل 2.5).

بالنسبة لألواح الخطوط ، يتم إخراج اللقاح بالطريقة نفسها كما هو مذكور ويتم لمس الوسط الصلب في طبق. الإبرة ملتهبة لقتل البكتيريا الزائدة وتبريدها. ينتشر اللقاح عن طريق وضع خط مع الإبرة (الشكل 2.6). يتم حرق الإبرة مرة أخرى لنفس الغرض وتبريدها.

خطوط متواصلة ومتعرجة قوس مخططة لتقليل عدد الخلايا على طول الخط تدريجياً والحصول على مستعمرات مفردة معزولة بعد الحضانة. يتم إجراء عملية التطعيم بأكملها بطريقة معقمة أمام اللهب القوي. يتم تحضين الشرائح والألواح الملقحة (في وضع مقلوب) طوال الليل عند 37 درجة مئوية.


  • تقنية التعقيم هي في الأساس عقلية إبقاء الأشياء خالية من التلوث ، حيث أن العالم الذي نعيش فيه يحتوي على الكثير من الميكروبات التي يمكن أن تتداخل مع التجارب.
  • يؤدي تسليط المستعمرات إلى عزل المستعمرات الفردية ، وهي مجموعة من الميكروبات جاءت من سلف واحد من ميكروب.
  • تسمح لوحات الانتشار بالانتشار المتساوي للبكتيريا على طبق بتري مما يسمح بعزل المستعمرات الفردية ، للعد أو إجراء مزيد من التجارب.
  • مستعمرة: يتم تعريف المستعمرة البكتيرية على أنها مجموعة مرئية من البكتيريا تنمو على سطح أو داخل وسط صلب ، ويفترض أنها مستزرعة من خلية واحدة.
  • موقد بنسن: موقد غاز صغير للمختبر يمكن التحكم في إمداد الهواء به بفتحة قابلة للتعديل.

يمتلك علماء الأحياء الدقيقة العديد من الأدوات ، ولكن يتم استخدام أربع تقنيات بسيطة نسبيًا من قبل علماء الأحياء الدقيقة يوميًا ، وقد تم توضيحها هنا.

يتم استخدام تقنية التعقيم أو تقنية التعقيم لتجنب تلوث الوسائط والمعدات المعقمة أثناء زراعة الخلايا. يجب دائمًا استخدام التقنية المعقمة عند العمل مع مزارع الخلايا الحية والكواشف / الوسائط التي سيتم استخدامها لمثل هذه الثقافات. تتضمن هذه التقنية استخدام اللهب لقتل الكائنات الملوثة ، وطريقة عامة للعملية تقلل من تعرض الوسائط والمعدات المعقمة للملوثات.

شكل: التخفيف المتسلسل: مثال على التخفيف المتسلسل للبكتيريا في خمس خطوات. تم بعد ذلك نشر البكتيريا المخففة بالطلاء. بواسطة Leberechtc (عمل خاص) [GFDL (http://www.gnu.org/copyleft/fdl.html) و CC-BY-3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/3.0)] ، عبر ويكيميديا كومنز

عند العمل مع مزارع الكائنات الحية ، من المهم للغاية الحفاظ على البيئات التي تُزرع فيها الخلايا ويتم التلاعب بها على أنها خالية من الكائنات الحية الأخرى قدر الإمكان. وهذا يتطلب تقليل تعرض حاويات وسائط الاستنبات المعقمة للهواء الخارجي ، واستخدام اللهب في & ldquore-تعقيم & rdquo أغطية الحاويات والحافات. وهذا يعني تمرير الحافات والأغطية من خلال اللهب الناتج عن موقد بنسن من أجل قتل الكائنات الحية الدقيقة التي تتلامس مع تلك الأسطح.

التقنية المعقمة ، بشكل عام ، هي حالة مكتسبة ، أو تعويذة ، حيث يأتي كل استخدام لأي مادة معقمة مع تحذير من اتخاذ كل الاحتياطات لضمان بقائها خالية من الملوثات قدر الإمكان لأطول فترة ممكنة. تعتبر الحرارة وسيلة ممتازة لقتل الكائنات الحية الدقيقة ، وموقد بنسن هو أفضل فني معقم وصديق لرسكووس.

التخفيف المتسلسل هو التخفيف التدريجي لمادة في المحلول. عادة ما يكون عامل التخفيف في كل خطوة ثابتًا ، مما يؤدي إلى تقدم هندسي للتركيز بطريقة لوغاريتمية. يمكن أن يكون التخفيف التسلسلي بعشرة أضعاف 1 م ، و 0.1 م ، و 0.01 م ، و 0.001 م ، وتستخدم التخفيفات التسلسلية لإنشاء حلول مخففة بدقة أيضًا. يمكن تخفيف ثقافة الميكروبات بنفس الطريقة. للتخفيف بعشرة أضعاف على مقياس 1 مل ، تمتلئ القوارير بـ 900 ميكرولتر من الماء أو الوسائط ، ويتم نقل 100 ميكرولتر من المحلول الميكروبي المخزن بشكل متسلسل ، مع خلط شامل بعد كل خطوة تخفيف. يعتبر تخفيف الميكروبات مهمًا جدًا للوصول إلى الميكروبات المخففة بدرجة كافية للاعتماد على لوحة الانتشار (الموصوفة لاحقًا).

شكل: لوحة خط: أربع لوحات خط. تؤدي الشرائط الناجحة إلى مستعمرات فردية من الميكروبات.

في علم الأحياء المجهرية ، يعد التلطخ تقنية تستخدم لعزل سلالة نقية من نوع واحد من الكائنات الحية الدقيقة ، غالبًا البكتيريا. يمكن بعد ذلك أخذ العينات من المستعمرات الناتجة ويمكن زراعة مزرعة ميكروبيولوجية على صفيحة جديدة بحيث يمكن التعرف على الكائن الحي أو دراسته أو اختباره ، ويتم عمل الخطوط باستخدام أداة معقمة ، مثل قطعة قطن أو عادة حلقة التلقيح. يتم غمس هذا في لقاح مثل المرق أو عينة المريض التي تحتوي على العديد من أنواع البكتيريا. تنتشر العينة عبر ربع واحد من طبق بتري يحتوي على وسط نمو ، وعادة ما يكون صفيحة أجار تم تعقيمها في الأوتوكلاف. يعتمد اختيار وسيط النمو المستخدم على الكائن الدقيق الذي يتم تربيته أو اختياره. عادة ما تكون وسائط النمو عبارة عن أشكال من مادة الأجار ، وهي مادة هلامية مشتقة من الأعشاب البحرية.

لوحات الانتشار هي ببساطة ميكروبات منتشرة على لوحة وسائط. الميكروبات في محلول ويمكن تخفيفها. ثم يتم نقلها إلى طبق بتري مع وسائط خاصة لنمو الميكروب المعني. يتم بعد ذلك نشر المحلول بشكل موحد من خلال عدد من الوسائل الممكنة ، وأكثرها شيوعًا هو استخدام حبات زجاجية معقمة يتم هزها فوق الوسائط ، وتنشر السائل المحتوي على الميكروبات بالتساوي على اللوحة. ومن الشائع أيضًا استخدام قضيب من الزجاج المثني ، وغالبًا ما يشار إليه باسم عصا الهوكي ، نظرًا لشكله المماثل. يتم تعقيم القضيب الزجاجي واستخدامه لنشر السائل المحتوي على الميكروبات بشكل موحد على اللوحة.


افتح أنبوب الثقافة واجمع عينة من العينة باستخدام الحلقة المعقمة:

يمكن الحصول على العزلة من أي مجموعة متنوعة من العينات. يصف هذا البروتوكول استخدام ثقافة مرق مختلطة ، حيث تحتوي الثقافة على عدة أنواع أو سلالات بكتيرية مختلفة. يمكن أن تأتي العينة المخططة على الصفيحة في مجموعة متنوعة من الأشكال ، مثل العينات الصلبة ، والعينات السائلة ، ومسحات القطن أو الرغوة. يجب التعامل مع المواد التي تحتوي على عوامل معدية بشكل مناسب في المختبر باستخدام إجراءات السلامة الحيوية.
قم بإزالة غطاء أنبوب الاختبار. يوصى بإبقاء الغطاء في يدك اليمنى (اليد التي تمسك الحلقة المعقمة). لف إصبع يدك اليمنى الصغير حول الغطاء لتثبيته أو أمسكه بين الإصبع الصغير والإصبع الثالث من الخلف. تمتد أغطية أنبوب الاختبار الحديثة فوق الجزء العلوي من أنبوب الاختبار ، مما يجعل حافة أنبوب الاختبار معقمة بينما حافة الغطاء لم تتعرض للبكتيريا. يمكن أيضًا وضع الغطاء على الطاولة المطهرة ، إذا تم إمساك أنبوب الاختبار بزاوية بحيث لا يسقط تلوث الهواء في الأنبوب. أدخل الحلقة في أنبوب الثقافة وقم بإزالة حلقة من المرق. استبدل غطاء أنبوب الاختبار وأعده إلى رف أنبوب الاختبار.


مبدأ Streaking

يتم تخفيف العينة / اللقاح عن طريق تسليطها على سطح لوحة أجار. أثناء وجود خطوط في مناطق متتالية من اللوحة ، يتم تخفيف اللقاح إلى النقطة التي توجد فيها خلية بكتيرية واحدة فقط تترسب كل بضعة ملليمترات على سطح صفيحة أجار. عندما تنقسم هذه الخلايا البكتيرية المنفردة وتنتج الآلاف والآلاف من الخلايا البكتيرية الجديدة ، تتشكل مستعمرة معزولة. يمكن الحصول على الثقافات النقية عن طريق انتقاء المستعمرات المعزولة جيدًا وإعادة وضع خطوط على أطباق أجار طازجة.

الافتراض الشائع هو أن مستعمرة البكتيريا المعزولة هي ذرية خلية بكتيرية واحدة (أي المستعمرة هي المستنسخة). ومع ذلك، هذا ليس صحيحا بالضرورة. مع الأنواع التي تشكل فيها الخلايا مجموعة مميزة أثناء الانقسامات الخلوية ، قد تتطور وحدة تكوين المستعمرة من مجموعة من الخلايا بدلاً من تكوين خلية واحدة. على سبيل المثال ، مجموعات المكورات العنقودية وسلاسل المكورات العقدية وما إلى ذلك.

المواد المطلوبة:

  • مصدر للبكتيريا (مزرعة مخزون ، صفيحة أجار مخططة مسبقًا أو أي لقاح آخر)
  • حلقة التلقيح
  • مهاجم / ولاعة
  • موقد بنسن
  • ليسول (10٪ حجم / حجم)
  • لوحة أجار (أجار المغذيات أو أي وسط أجار آخر)
  • مناديل ورقية

نصائح للحصول على أفضل النتائج:

  • استخدم فقط كمية صغيرة من اللقاح.
  • ضع خطًا خفيفًا حتى لا تقطع الأجار.
  • شعلة الحلقة بعد أن خط كل رباعي.
  • تأكد من خلو سطح اللوحة من قطرات الرطوبة المكثفة.

الغرض من تسليط الضوء

  • لإنتاج مستعمرات معزولة من كائن حي (بكتيريا في الغالب) على صفيحة أجار. يكون هذا مفيدًا عندما نحتاج إلى فصل الكائنات الحية في ثقافة مختلطة (لتنقية / عزل سلالة معينة من الملوثات) أو عندما نحتاج إلى دراسة مورفولوجيا مستعمرة كائن حي.
  • لتحديد الكائن الحي: الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا صالحة فقط عند إجرائها على مزارع نقية.

الهدف من تقنية الثقافة الفرعية

  • لزيادة الحياة و / أو زيادة عدد الخلايا أو الكائنات الحية الدقيقة في المزرعة.
  • اكتساب خبرة طريقة التعقيم في مجال علم الأحياء الدقيقة.
  • لمنع تلوث الثقافات والوسائط.
  • لنقل الثقافات من وسط واحد عن طريق تلقيح وسط آخر.
  • للحصول على ثقافة نقية من ثقافة مختلطة.
  • لوقف الكائنات الحية الدقيقة في المختبر من الاستمرار في الانتشار في الغلاف الجوي و / أو إصابة الباحث.

  1. أثناء ارتداء القفازات ، قم بتعقيم حلقة التلقيح بوضعها بزاوية فوق اللهب. يجب أن تتحول الحلقة إلى اللون البرتقالي قبل إزالتها من اللهب. يمكن استبدال مسواك معقم بحلقة التلقيح. يفعل ليس ضع المسواك فوق اللهب.
  2. قم بإزالة الغطاء من لوحة الثقافة التي تحتوي على الكائنات الحية الدقيقة المرغوبة.
  3. قم بتبريد حلقة التلقيح عن طريق طعنها في الأجار في مكان لا يحتوي على مستعمرة بكتيرية.
  4. اختر مستعمرة واكشط القليل من البكتيريا باستخدام الحلقة. تأكد من إغلاق الغطاء.
  5. باستخدام لوحة أجار جديدة ، ارفع الغطاء بما يكفي لإدخال الحلقة.
  6. خط الحلقة التي تحتوي على البكتيريا في الطرف العلوي من لوحة أجار تتحرك في نمط متعرج أفقي حتى يتم تغطية 1/3 من اللوحة.
  7. عقم الحلقة مرة أخرى في اللهب وقم بتبريدها على حافة الأجار بعيدًا عن البكتيريا الموجودة في اللوحة التي خطتها للتو.
  8. قم بتدوير اللوحة حوالي 60 درجة وانشر البكتيريا من نهاية الخط الأول إلى منطقة ثانية باستخدام نفس الحركة في الخطوة 6.
  9. عقم الحلقة مرة أخرى باستخدام الإجراء الوارد في الخطوة 7.
  10. قم بتدوير اللوحة حوالي 60 درجة وانتشر البكتيريا من نهاية الخط الثاني إلى منطقة جديدة بنفس النمط.
  11. عقم الحلقة مرة أخرى.
  12. استبدل الغطاء وثبته بشريط لاصق. اقلب الطبق واحتضنه طوال الليل عند 37 درجة مئوية (98.6 درجة فهرنهايت).
  13. يجب أن ترى الخلايا البكتيرية تنمو على طول الخطوط وفي مناطق معزولة.
  1. عند تعقيم حلقة التلقيح ، تأكد من أن الحلقة بأكملها تتحول إلى اللون البرتقالي قبل استخدامها على لوحات أجار.
  2. عند شد الأجار بالحلقة ، تأكد من إبقاء الحلقة أفقية وخط سطح أجار فقط.
  3. إذا كنت تستخدم أعواد أسنان معقمة ، استخدم عود أسنان جديدًا عند إجراء كل خط جديد. تخلص من كل أعواد الأسنان المستعملة.

جيم مراقبة عينات البكتيريا المعروفة

استخدم مصادر الإنترنت وعارض الشرائح والشرائح المعدة لتحديد الأشكال والأنواع المختلفة للبكتيريا. يجب أن يشمل التحقيق الخاص بك ، ولكن ليس بالضرورة أن يقتصر على البكتيريا المعروفة التالية.

1. الإشريكية القولونية
2. المكورات العنقودية الذهبية
3. العصوية الرقيقة
4. ضمة الكوليرا
5. Serratia marcescens
6. Lactococcus lactis

قم بتضمين الرسومات أو الصور أو أوصاف العينات التي شاهدتها في المعمل.

اختر نوعًا واحدًا من البكتيريا لعرضه في هذا القسم من التقرير وقدم معلومات إضافية حول البكتيريا ، مثل مكان العثور عليها وكيفية تكاثرها أو أهميتها للبحث العلمي. سوف تحتاج إلى البحث في هذا.


حالة خاصة: المشاريع التي تنطوي على كائنات دقيقة غير معروفة

  1. "The organism is cultured in a plastic petri dish (or other standard non-breakable container) and sealed. Other acceptable containment apparatus include Petrifilm TM and doubled heavy duty (2-ply) sealed bags.
  2. The experiment involves only procedures in which the petri dish remains sealed throughout the experiment (e.g. counting presence of organisms or colonies).
  3. The sealed petri dish is disposed of in the appropriate matter under the supervision of the designated supervisor." (Science Service, 2006)

If a culture of an unknown organism is opened for identification, sub-culturing, or isolation, it must be treated as a moderate-risk study and be carried out in a professional research setting under the supervision of a competent scientist who understands the risks associated with working with the microorganisms involved.


شاهد الفيديو: المسابح الطبيعية: النباتات وسيلة فعالة وغير مكلفة لتطهير المياه - science (قد 2022).


تعليقات:

  1. Wilmar

    فقط تجرؤ على فعل ذلك مرة أخرى!

  2. Cahir

    ماذا تعني الكلمة؟

  3. Tygor

    في رأيي ، لقد تمت مناقشة هذا بالفعل ، استخدم البحث.

  4. Ridgely

    فكرة مثيرة جدا للاهتمام



اكتب رسالة