معلومة

شرح البروتوكول في تجربة استخلاص الحمض النووي

شرح البروتوكول في تجربة استخلاص الحمض النووي


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

في قسم المواد والطرق من هذه الورقة عن استخراج وتحليل الحمض النووي من الشعر أنا لا أفهم بعض أجزاء من أساليب البروتوكول الخاصة بهم. خاصه:

"تم بعد ذلك استخلاص محلول الشعر المهضوم مرتين مع مجلدين من الفينول المشبع بواسطة محلول Tris-EDTA (TE) (Sigma) ، ومرة ​​واحدة مع مجلدين من الكلوروفورم."

كيف تلعب أحجام الفينول والكلوروفورم؟ أعلم أنها تستخدم في استخلاص مذيب عضوي ، لكن ما هو الإجراء الفعلي المتبع ، أي خطوات إضافة كل مادة كيميائية؟

كان هناك سؤال آخر كان عن المخزن المؤقت الذي استخدموه:

"0.01 M Tris-HCL (ph8) ، 0.005 M EDTA ، 0.1 M NaC1 ، 0.039 M DTT ، 2٪ SDS"

هذه المجموعة الكاملة ستكون "Tris buffer" إذن ، نعم؟ وبعد ذلك سيتم إضافة بروتين K إلى بعض من هذا المخزن لهضم الشعر؟


يحتوي محلول الحمض النووي على حجم ثابت (على سبيل المثال ، 0.1 مل). يضاف إلى أنبوب اختبار مناسب 0.2 مل من الفينول المشبع بالعازل. بعد إغلاق أنبوب الاختبار ، يتم خلط الخليط جيدًا ، عادةً باستخدام خلاط دوامة ، ولكن ربما عن طريق الانقلاب الدقيق والمتكرر. إن المرحلة المائية والمرحلة العضوية بالكاد قابلة للامتزاج. يتم الطرد المركزي للأنبوب لتسريع الموازنة ، وتركيز البروتين المشوه في الواجهة. بعد الطرد المركزي ، تتم إزالة الطبقة المائية بعناية إلى أنبوب اختبار جديد.

هذا هو استخراج عضوي واحد. يتكرر هذا مع قسامة جديدة من الفينول المشبع بالعازل (0.2 مل آخر). ثم يتم صب المرحلة المائية مرة أخرى واستخلاصها بـ 0.2 مل من CHCl3.

وفقًا للوصفة التي قدمتها ، تم شراء الفينول المشبع بالعازل من بائع (Sigma-Aldrich Chemicals ، من سانت لويس ، ميسوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، حتى تتمكن من البحث عن المكونات والتكوين في الكتالوج الخاص بهم على الإنترنت (بلا شك) .

وصفة العازلة التي قدمتها هي عازلة هضم بروتيناز ك. يتم إجراؤه عادةً في درجة حرارة مرتفعة.

تم تصميم هذا البروتوكول لعزل الحمض النووي من نوى خلايا الشعر. نصف محتويات النواة حقيقية النواة بالكامل عبارة عن بروتينات صبغية ، بالكتلة ، وبالتالي فإن خطوة هضم البروتيناز K لا تفتح فقط خلايا الشعر ، ولكنها تساعد أيضًا في إزالة جميع البروتينات الخلوية والنووية غير المرغوب فيها والملوثة.


شرح البروتوكول في تجربة استخلاص الحمض النووي - البيولوجيا

  • قطعة بصل (حوالي 10 جرام)
  • عدد 2 أنبوب اختبار كبير
  • هاون ومدقة أمبير
  • أسطوانة مدرجة (10 أو 50 مل)
  • دورق 500 مل ، أو برطمان ماسون
  • سيخ كباب الخيزران
  • شبكة من النايلون ، أو شبكة غمس صغيرة
  • قمع
  • سكين مطبخ صغير (أو ماكينة حلاقة ذات حافة واحدة)
  • الإيثانول البارد
  • حمام جليدي (قد يكفي واحد لكل فصل دراسي)
  • محلول المنظف = جزء من ملح الطعام + جزء من شامبو عام مركز + 8 أجزاء ماء
  • محلول الإنزيم = جزء من مسحوق مطري اللحم + 19 جزء من الماء

التعليمات: اكتب ملاحظات مفصلة عما تراه وتفعله في كل خطوة أدناه.

1) أحضر قطعة صغيرة من البصل (حوالي 10 سم 3) واقطعها إلى مكعبات صغيرة (لتر 1 مم 3)

2) ضع البصل المفروم في الهاون وطحنه جيدًا بالمدقة.

3) أضف حوالي 10 مل من محلول المنظف واطحن مرة أخرى.

4) قم بتصفية الخليط من خلال الشبكة في أنبوب اختبار كبير.

5) أضف حوالي 3-4 مل من محلول الإنزيم إلى أنبوب الاختبار.

6) دع الخليط يقف في دورق من ماء الصنبور الساخن لمدة 10 دقائق.

7) ضع أنبوب الاختبار في الحمام الجليدي ليبرد لعدة دقائق.

8) صب بعناية 10 مل من الإيثانول المثلج في أنبوب الاختبار لتشكيل طبقة منفصلة في الأعلى. (يجب أن ترى خصلات صغيرة من الهلام تتشكل عند الحدود).

9) باستخدام سيخ الخيزران ، قم بلف الحمض النووي المترسب برفق. أظهرها لمدرسك للتحقق من أن لديك الحمض النووي.

لماذا ا؟ الحمض النووي طويل ورفيع لذا فهو يلتف حول عود الأسنان مثل السباغيتي على شوكة!

10) سؤال أخير لك. لماذا لم يدمر كل هذا الطحن والتقطيع الحمض النووي؟

الحمض النووي صغير جدًا ويتم لفه بإحكام بواسطة بروتينات هيستون بحيث يفلت من معظم العلاج الطبيعي. بمجرد إطلاقه من الهستونات بواسطة محلول الإنزيم ، فإنه يتحول إلى خيوط طويلة ويصبح أكثر هشاشة.


البروتوكول: استخراج الحمض النووي

أبدأ جميع تجاربي تقريبًا بنفس الإجراء: استخراج الحمض النووي المؤتلف من بكتريا قولونية. في بحثي ، أقوم بتغيير تسلسل الحمض النووي من أجل إنتاج أدوية تستهدف أنواعًا معينة من الخلايا في جسم الإنسان. بصفتي مهندسًا بيولوجيًا ، أقوم بتجميع قطع الجينات في قطع دائرية من الحمض النووي (البلازميدات) لإنشاء مسارات خلوية جديدة. على الرغم من أن العديد من البروتوكولات التي أستخدمها في المختبر تستغرق وقتًا طويلاً ولديها معدل فشل مرتفع ، إلا أن استخراج الحمض النووي بسيط ، ويعمل بنسبة 99٪ من الوقت ، ويستغرق أقل من 30 دقيقة.

إن تكوين بلازميد جديد هو عملية تكرارية. عندما أقوم بإضافة كل قطعة جديدة إلى البلازميد الخاص بي ، أقوم بنقل الحمض النووي للداخل والخارج بكتريا قولونية الخلايا. تعمل الخلايا كمخزن حي وآلات زيروكس الصغيرة ، وتعيد إنتاج الحمض النووي وملء الخلايا بالنسخ التي سأستخدمها في الخطوة التالية من العملية. أقوم باستخراج الحمض النووي ، وأقطع ولصق جينات جديدة في البلازميد ، وأدخله مرة أخرى في مجموعة جديدة من الخلايا. في النهاية سوف أحصد البلازميد الكامل من بكتريا قولونية ونقله إلى خميرة أو خلية حيوانية.

يوجد أدناه بروتوكول عام لاستخراج DNA البلازميد بكتريا قولونية خلايا البكتيريا. الهدف العام هو فصل البلازميد المرغوب عن المكونات الخلوية الأخرى (الحمض النووي الريبي ، البروتين ، الحمض النووي الصبغي ، إلخ).

    أنا إما أن أبدأ من بكتيريا تنمو في طبق بتري ، أو من قوارير البكتيريا المخزنة في -80 درجة مئوية. بكتريا قولونية التي تحتوي على البلازميدات المؤتلفة عادةً ما يتم تخزينها مجمدة في الجلسرين ، والذي يعمل كمانع للتجميد - تمامًا مثل الطعام المجمد ، لا نريد أن تتعرض البكتيريا لحرق المجمد. باستخدام مسواك معقم ، آخذ القليل من البكتيريا المجمدة وأضعها في أنبوب اختبار يحتوي على Lysogeny Broth (غالبًا ما يُشار LB إلى Luria مرق Luria أو مرق Luria-Bertani ، بعد العلماء الذين طوروا الوسيط). LB هو غذاء غني للبكتيريا يوفر لهم جميع اللبنات البروتينية التي يحتاجونها للنمو.

ديفين بوريل هو زميل ما بعد الدكتوراه في معهد ويس للهندسة المستوحاة بيولوجيًا في جامعة هارفارد. يركز بحثها الحالي على هندسة الأدوية المستهدفة لعلاج فقر الدم وأمراض المناعة الذاتية والعدوى الفيروسية.


استخراج الحمض النووي باستخدام الخرز المغناطيسي

يعد التقاط الخرزة المغناطيسية أحدث طريقة لاستخراج الحمض النووي. يعمل عزل الحمض النووي للدم بالكامل باستخدام خرز مغناطيسي عن طريق التقاط الحمض النووي على حبات مغناطيسية مطلية بمصفوفة من السيليكا لربط الأحماض النووية.

كما هو الحال مع طرق كيمياء الترسيب ، يجب أولاً تفكيك خلايا الدم بأكملها باستخدام SDS أو المنظفات المماثلة. تتضمن الخطوة التالية مزيجًا من الخلايا المتحللة والخرز المغناطيسي ، مما يسمح للحمض النووي بربط الخرزات.

عدة جولات من الغسيل في وجود مجال مغناطيسي ثم تفصل الحمض النووي الملتقط على خرز مغناطيسي من الملوثات الخلوية الأخرى غير المرتبطة. بعد ذلك ، يقوم المخزن المؤقت منخفض الملح بإزالة الحمض النووي من الحبيبات.

بعض الدراسات ، بما في ذلك مراجعة بواسطة Carpi وآخرون.، تشير إلى أن الخرزات المغناطيسية يمكن أن تكون أسرع طريقة. 1 ومع ذلك ، فإن هذه السرعة لها ثمن - سواء من الناحية المالية أو من حيث إنتاج الحمض النووي الخاص بك ونقاءه. 2 يمكن أن يؤدي نهج الخرزة المغناطيسية إلى تقليل ما يصل إلى 20٪ في إنتاج الحمض النووي الخاص بك. وأيضًا ، فإن أي حامل مغناطيسي للخرز يلوث عينة الحمض النووي ويتداخل مع تطبيقات المصب. أخيرًا ، إنها الطريقة الأكثر تكلفة لأنها تتطلب حوامل التقاط مغناطيسية ولوحات وحبات مغناطيسية.


تحدي التدريس رقم 1: كيف يمكنني تطوير إجراءات وإجراءات لدعم الطلاب للعمل بشكل مستقل في الفصل الدراسي للعلوم؟

تحدي التدريس رقم 2: كيف يمكنني تطوير ثقافة الفصل الدراسي التي تشجع مشاركة الطلاب وفضولهم ورغبتهم في فهم العالم من خلال الاستكشاف العلمي؟

قد لا يتم حل هذين التحديين المترابطين أو التغلب عليهما بالكامل من خلال هذا النشاط ، ولكن هذا النشاط يمثل عدة خطوات على طول الرحلة التي تستغرق عامًا (والتي من خلالها سأرافق الطالب) ويمتد إلى ما بعد صفي. آمل أن تتطور هذه التجارب نحو شعور أكبر بالاستقلالية والفضول عندما يصبحون بالغين.

بدلاً من البدء من نقطة الصفر ، والذي لن يؤدي إلا إلى عدد من النظرات المذهلة والصمت المحرج بين الفصل ، وجهت الطلاب إلى استخدام مختبر استخراج الحمض النووي والرابط المقدم. باستخدام هذا الجزء من السقالات ، سيقوم الطلاب بدراسة البروتوكول (حسب المورد عبر الإنترنت المقدم) ومناقشة العملية في فرقهم. بعبارة أخرى ، "ما الذي سيتطلبه منهم فعلاً القيام بذلك عندما يحصلون على الضوء الأخضر للذهاب؟"

في رأيي ، أتخيلهم كمظليين ينتظرون عند مدخل طائرة الشحن C-17 في انتظار "الضوء الأخضر" الذي يطلق القتال أو الطيران الحتمي. آمل أن تقودهم الاستعدادات اليوم إلى أن يكونوا متحمسين للقيام بالقفزة غدًا بدلاً من الانطلاق بعيدًا عن الباب قدر الإمكان! يعد مفهوم نموذج المعمل هذا قياسيًا جدًا في صفي ويمكن استكشافه أكثر قليلاً من أحد دروسي السابقة.

بعد ذلك ، سيوافق الطلاب على الخطوات المحددة التي سيقوم بها كل عضو لأداء فريق عادل ومتوازن (في اليوم الثاني). سيقومون بعد ذلك بكتابة بروتوكول (بناءً على رابط الويب) يركز على خطوات محددة والطلاب في الفريق الذي سينفذ هذه الخطوات.


الارتباط بمعايير مدينة نيويورك

S2a- يوضح الطالب فهمًا للخلية.

S4d- يقدم الطالب دليلًا يوضح فهم تأثير التكنولوجيا مثل القيود والمفاضلات والمزايا والمخاطر والمشكلات والحلول.

S5c- يستخدم الطالب أدلة من مصادر موثوقة لتطوير الأوصاف والتفسيرات والنماذج.

S6a- يستخدم الطالب التكنولوجيا والأدوات لمراقبة وقياس الأشياء والكائنات والظواهر بشكل مباشر وغير مباشر وعن بعد ، مع مراعاة الدقة والدقة.


الحمض النووي أكثر قابلية للذوبان في مرحلة الماء

إذن ما علاقة هذا بفصل الحمض النووي والبروتين؟

حسنًا بشكل عام ، تذوب المركبات القطبية (المشحونة) بشكل أفضل في المذيبات القطبية وتذوب الجزيئات غير القطبية بشكل أفضل في المذيبات الأقل قطبية أو غير القطبية.

الحمض النووي هو جزيء قطبي بسبب الشحنات السالبة الموجودة على العمود الفقري للفوسفات ، لذلك فهو قابل للذوبان في الماء بشدة وأقل في الفينول. هذا يعني أنه عندما يتم خلط الماء (+ DNA + البروتين) والفينول في البروتوكول ، لا يذوب الحمض النووي في الفينول ، ولكنه يبقى في مرحلة الماء.


نتائج

مقارنات مع الدم

أسفرت عينات الدم والبراز المقترنة عن أنماط وراثية متطابقة لكل من النسخ المتماثلة لجميع العينات باستثناء موقعين متعددي الإرسال (AE16 و MAF65) من فرد واحد أعطى أنماطًا وراثية متسقة ولكن مختلفة لكلا التكرارات. تطابق نسختان إضافيتان من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لكل من الدم والحمض النووي البرازي نتائج الحمض النووي البرازي في الجولات الأولى ، مما يشير إلى أن الحمض النووي من الدم أنتج أليلات كاذبة في الجولات الأولى. واحد من هؤلاء كان من بئر التي أظهرت جفافا ملحوظا. أظهر كل من هذين الموقعين في السابق ميولًا من حين لآخر لتضخيم الأليلات الزائفة التي هي أليلات موجودة في المجموعات السكانية المدروسة.

تجارب استخراج الحمض النووي في البراز

أسفرت مادة الحبيبات الخارجية عن نتائج جيدة باستمرار. فقط عندما انخفضت مادة الحبيبات الخارجية إلى 15 مجم ، بدأت النتائج في إظهار انخفاض ملحوظ في نجاح PCR (الشكل 1). بالنسبة للعلاجات الثلاثة التي استخدمت 60 ملغ من مادة الحبيبات الخارجية (تم استبعاد خطوتين إضافيتين من الاستخراج) ، أسفرت 8 من 12 عينة عن درجات مؤشر PCR مثالية من أربعة ، وتم تصنيف 15 فقط من 576 تضخيمًا إجماليًا على أنها أقل من جيدة. من بين هؤلاء الخمسة عشر ، تم عكس 13 قمة وكان الاثنان المتبقيان من تفاعل واحد متعدد الإرسال ربما كان بسبب ظروف تفاعل غير مناسبة بدلاً من كمية قالب DNA. أدى تقليل كمية مادة الحبيبات الخارجية إلى انخفاض صغير ، ولكن قابل للقياس في نجاح تفاعل البوليميراز المتسلسل ، خاصة عند 15 مجم ، (الشكل 1 ص = .022 لـ 60 مجم مقابل 15 مجم ، ص = .061 لـ 60 مجم مقابل 30 مجم ANOVA للتضخيم الجيد).

أظهرت ارتفاعات الذروة نمطًا مختلفًا إلى حد ما من التباين في العلاجات التي تتضمن قيم مادة الحبيبات الخارجية (الشكل 2) لكل من 30 مجم و 15 مجم كانت أقل بشكل ملحوظ مقارنة بـ 60 مجم (ص & lt .001) ، ولكن لا تختلف عن بعضها البعض (ص = 1.000).

كانت هناك اختلافات واضحة في قيم مؤشر PCR بين مواد الحبيبات المختلفة المستخدمة عند مقارنة جميع المعالجات (الشكل 1 ص & lt .001 لجميع المقارنات اختبارات G لعملية الاستخراج الكاملة) تباين نجاح تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل عكسيًا مع نسبة مادة الحبيبات الداخلية المستخدمة. كان لاستخدام مادة الحبيبات الداخلية تأثير مماثل على مؤشر ارتفاع الذروة (الشكل 2 ص & lt .001 لجميع المقارنات لعملية الاستخراج الكاملة).

لم تسفر إجراءات الاستخراج المختلفة لمادة الحبيبات الخارجية عن فروق ذات دلالة إحصائية في نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل (ص = .177 ANOVA لعدد من النتائج الجيدة). وبالمثل ، لم يظهر مؤشر ارتفاع الذروة أي آثار من تمديد ترسيب الإيثانول (ص = 1.000) ، ولكنهم أظهروا انخفاضًا ملحوظًا عند التخلص من الضرب بالخرز أيضًا (الشكل 2 ص = .013 نسبة إلى العملية الكاملة و 0.021 نسبة إلى عدم تمديد ترسيب الإيثانول). عندما تم دمج العينات لكل علاج يتضمن مادة بيليه كاملة ، اقترح النمط تحسينات في نتائج PCR من خطوات الاستخراج الإضافية (الشكل 1) ، وكان اختبار G للمعالجات الثلاثة مهمًا (ص = .006). ومع ذلك ، في حالة تضمين أي مادة حبيبية داخلية في عمليات استخلاص الحمض النووي ، أظهرت العينات الفردية الأربعة أنماطًا متباينة على نطاق واسع للعلاجات المختلفة ، بما في ذلك عينة واحدة (INY 1-15) حيث أدت خطوات الاستخراج الإضافية إلى خفض نجاح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بشكل كبير. تضمن النجاح لهذه العينة الضرب بالخرز (الشكل 3) ، مما يشير إلى تأثير التفاعل بين الضرب بالخرز وترسيب الكحول الممتد. نظرًا للاختلاف الواسع بين العينات ، لم يكن ANOVA لعدد النتائج الجيدة التي تقارن إجراءات الاستخراج لمادة الحبيبات الكاملة مهمًا (ص = .474). في المقابل ، أنتجت ارتفاعات الذروة اختلافات كبيرة للمقارنات مع عملية الاستخراج الكاملة لمادة الحبيبات الكاملة (الشكل 2 ص = .012 للعملية الكاملة مقابل عدم تمديد ترسيب الإيثانول و ص & lt .001 للعملية الكاملة مقابل عدم تمديد ترسيب الإيثانول أو الضرب بالخرز) ولكن إجراءي الاستخراج المتغيرين لم يختلفا عن بعضهما البعض (ص = .151).

مؤشر تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للعلاجات التي تشمل مادة الحبيبات الكاملة والداخلية حسب العينة. المعالجات لكل عينة من اليسار إلى اليمين هي: الحبيبات الكاملة ، الحبيبات الكاملة للعملية الكاملة ، عدم تمديد الحبيبات الكاملة لترسيب الإيثانول ، عدم وجود حبات الضرب أو ترسيب الإيثانول الممتد والحبيبات الداخلية ، عملية كاملة.

مؤشر تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للعلاجات التي تشمل مادة الحبيبات الكاملة والداخلية حسب العينة. المعالجات لكل عينة من اليسار إلى اليمين هي: الحبيبات الكاملة ، الحبيبات الكاملة للعملية الكاملة ، عدم تمديد الحبيبات الكاملة لترسيب الإيثانول ، عدم وجود حبات الضرب أو ترسيب الإيثانول الممتد والحبيبات الداخلية ، عملية كاملة.

أظهرت نتائج PCR أيضًا تباينًا كبيرًا بين العينات حيث تم استخدام مادة الحبيبات الداخلية فقط (الشكل 3). وبالتالي ، في حين أن ANOVA لنتائج PCR الجيدة التي تقارن مواد الحبيبات الثلاثة المختلفة كانت مهمة (ص = .008) ، كان الاختلاف الوحيد المهم بعد الصدمة هو الحبيبات الخارجية مقابل الحبيبات الكاملة (ص = .008).

تم تحديد قيمة مؤشر PCR المنخفضة لعملية الاستخراج الكاملة لمواد الحبيبات الكاملة للعينة INY 1-15 (الشكل 3) في ANOVA ذات النتائج الجيدة باعتبارها متطرفة إحصائية. وبالتالي ، تم إجراء استخلاصين مكررين إضافيين من مادة الحبيبات الكاملة لهذه العينة جنبًا إلى جنب مع تقارير تفاعل البوليميراز المتسلسل نفسها. أنتج كل من استخراج الحمض النووي المتماثل قيم مؤشر PCR قريبة من الأولى (1.54 و 1.56 و 1.62). من الواضح أن هذا الاستثناء الإحصائي يمثل معلومات مهمة وليس ضوضاء. بالإضافة إلى ذلك ، يشير تقارب قيم مؤشر PCR بين تلك التكرارات الثلاثة إلى أن هذا المؤشر هو مقياس حساس ومتسق لنجاح PCR.

لم يكن ترسيب الكحول الممتد المدمج في عملية استخراج الحمض النووي الكاملة لدينا غير متناسق فقط في تأثيره على نتيجة PCR ، بل زاد أيضًا من التباين بين العينات في مؤشر ارتفاع الذروة للمواد الحبيبية الخارجية والكاملة (الشكل 2). بالنسبة لمادة الحبيبات الخارجية ، كان هذا التباين المتزايد ناتجًا عن انخفاض ملحوظ في مؤشر ارتفاع الذروة لعينة مختلفة (B76-8) عن تلك المتأثرة لمادة الحبيبات الكاملة. بشكل عام ، أظهر مؤشر ارتفاع الذروة علاقة مقاربة مع مؤشر PCR (الشكل 2).


تجربة استخراج الحمض النووي البصل

مقدمة
في هذه التجربة ، يتم استخدام البصل ، وذلك لأن البصل يحتوي على نسبة منخفضة من النشا ، مما يسمح للحمض النووي أن يكون مرئيًا بوضوح. يحمي الملح الطرف السلبي لفوسفات الحمض النووي ، مما يسمح للطرف بالاقتراب بحيث يمكن للحمض النووي أن يترسب من محلول كحول بارد. تتسبب المنظفات في تحلل أغشية الخلايا عن طريق إذابة الدهون والبروتينات من الخلايا وتعطيل الروابط التي تمسك أغشية الخلايا معًا. ثم تشكل المنظفات معقدات تحتوي على الدهون والبروتينات ، مما يجعلها تترسب في المحلول البصل (alium cepa)

المعدات والمواد
الإيثانول 95٪.
ميزان الحرارة
طبق.
كوب القياس.
1000 مل من زجاج البكير.
قمع.
منقي
أنبوب اختبار
الفريزر
طبق ساخن مع حمام
مكعب ثلج.
ملعقة
صابون غسيل الصحون أو الشامبو
ملح الطعام ، معالج باليود أو غير معالج باليود
ماء مقطرة
بصل كبير
خلاط وسكين لتقطيع البصل.
مؤقت أو ساعة

3. أضف الماء المقطر إلى الدورق إلى الحجم النهائي 100 مل. قم بإذابة الملح عن طريق التحريك ببطء لتجنب تكوين رغوة.

4. نقطع بصلة كبيرة بسكين ثم نضعها في وعاء زجاجي سعة 1000 مل


6. أدخل كوب 1000 مل من محلول الحمض النووي في حمام ماء ساخن عند 55-60 درجة مئوية ، كما هو موضح في الشكل أدناه ، لمدة 10-12 دقيقة.

8. تبريد الخليط في حمام مائي مثلج ، حوالي 4 درجات مئوية ، كما هو موضح في الصورة أدناه ، لمدة 5 دقائق. في هذه العملية ، اضغط على خليط DNA البصل على جانب الزجاج مع عودة الملعقة. تعمل هذه الخطوة على إبطاء تلف الحمض النووي.



10. قم بإزالة محلول البصل DNA في أنبوب التفاعل حوالي 5 مل. يمكن تخزين المحاليل في الثلاجة لمدة يوم تقريبًا قبل استخدامها في الخطوات التالية.

11. خذ محلول إيثانول بارد 95٪ من الفريزر وأضفه إلى أنبوب الاختبار لجعل طبقة الإيثانول أعلى من 1 سم (سم). للحصول على أفضل النتائج ، يجب أن يكون الإيثانول باردًا قدر الإمكان. يمكن إضافة الإيثانول إلى المحلول

12. الحمض النووي لا يذوب في الإيثانول. عند إضافة الإيثانول إلى الخليط ، تظل جميع مكونات الخليط ، باستثناء الحمض النووي ، في المحلول بينما يستقر الحمض النووي في طبقة الإيثانول. يُترك المحلول لمدة 2-3 دقائق ثم يستقر الحمض النووي الأبيض في طبقة الإيثانول.



13. يمكن أخذ الحمض النووي المتشكل بواسطة سن أو ماصة أو أي جذع لمحرك ملتوي يمكن أن يأخذ الحمض النووي

تدفق الفصل الدراسي: الملاحظات والتأملات المعملية

1. سيستقر الطلاب في مكان أكثر هدوءًا بينما يراقبون مسارات التحويل الخاصة بهم وينتظرون أن تكون عيناتهم جاهزة للاستخراج. ستكون هناك ثلاث مراحل أساسية:

  • وضع طبقة دقيقة من خليط الفراولة والكحول
  • إدخال المحرض الزجاجي في الطبقة الوسطى حيث يوجد الحمض النووي
  • الاستخراج البطيء للحمض النووي من الأنبوب

2. بمجرد أن يبدأ الطلاب في استخراج الحمض النووي الخاص بهم ، كن متواجدًا للتشجيع والتهنئة! يحب الأطفال هذا النوع من التعليقات من معلميهم خاصة أثناء المواقف المعملية. إنها فرصة رائعة لبناء مجتمع واتصالات حيث تشترك في مصلحة مشتركة وتتعاون لإنجاز مهمة ما.

3. عندما يبدأ الطلاب في تنظيف موادهم والعودة إلى جداول المختبرات الخاصة بهم للعمل على أسئلة التحليل الخاصة بهم ، ذكر الطلاب أنه يمكنهم العمل على أسئلة الملاحظة / التحليل المعملية كفريق واحد أو البحث عن تعريفات ومخططات النوكليوتيدات استعدادًا لـ السؤال الأخير في مستند المعمل.


شاهد الفيديو: هل يمكن التحكم بالإنسان عبر لقاح كورونا اسمع ما يقول عالم روسي (قد 2022).


تعليقات:

  1. Elidor

    أوافق ، شيء جيد جدا

  2. Minos

    في رأيي ، لقد تمت مناقشة هذا بالفعل ، استخدم البحث.

  3. Yosho

    من الجيد دائمًا قراءة الأشخاص الأذكياء. شكرًا!

  4. Thearl

    آسف للتدخل ، ولكن هل يمكنك إعطاء المزيد من المعلومات.

  5. Akinos

    ماذا يمكنك أن تقول عن هذا؟



اكتب رسالة